Transwell 是检测细胞侵袭能力的检测方法我们所使用的是 Chemicon 公司的 ECM554,基质胶已经包被好了,买来就可以用,很方便,而且我们算过,跟自己买胶来包被价格相差不大。这种胶 4 度下很软,37度则变得比较坚硬,因此用前应先放在培育箱中 10 分钟作用,使胶完全凝固。该试剂盒对穿过膜的细胞进行荧光染色,再用裂解液裂解细胞后检测荧光值。我们在实际使用的时候对穿过膜的细胞采纳 1%结晶紫染色,镜下计数细胞数目。结晶紫也可以用 33%醋酸溶解,再用酶标仪 570nm 检测,同样可以反应穿过细胞数因为基质胶的厚度直接影响穿过膜的细胞数,因此建议有条件的话还是买这类已经铺好胶的试剂盒,比较可靠。说明书该公司网上可以下载,对原理也有比较详细的阐述,可以去查一下。我们做的时候,上室用 0.5%BSA 的培育液,下室用 5%血清的培育液,下室血清的浓度可根据细胞类型的不同进行调整,假如细胞侵袭能力强,可适当降低血清浓度,否则可适当提高血清浓度。需要注意的是:1。上室内的细胞数目要适当,过多,穿过膜的细胞会过多过快,假如用计数法的话将难以计数;最少也要保证在收样的时候,上室内还要有细胞存在。具体细胞密度需要自己摸索。2。细胞计数的准确性对结果影响很大,各组间最好不要分开计数。尽量用同一密度的细胞悬液给予不同处理,保证各组细胞量一致3。对细胞的处理不可影响细胞生存。否则难以肯定是细胞量的改变还是侵袭能力改变侵袭小室其实不止是 transwell 的,其它像 Boyden chamber、Thincert 也挺好用的。我用过 Thincert,个人感觉不错,而且价格便宜,是 grelner 的,孔径 8 微米用于 24孔板的一个才 45 块人民币,而且可以零买,不想 transwell,总是一箱一箱的卖,实在是太贵了!侵袭实验要结合实验目的,不一定非要包被的。下面奉上用 Thincert 做侵袭实验的步骤(摘自《A quantitative cell migration assay using ThinCert™ cell culture inserts》,大家如需要,可用 google 搜之:1. Prepare cell cultures according to standard cell culture procedures2. Starve cells overnight in serum-free medium with 0.2 % BSA3. Harvest cells and wash them twice in PBS4. Resuspend cells in serum-free medium with 0.2 % BSA to an appropriate final cell concentration (e.g. 106/ml5. Place 24 well ThinCertTM cell culture inserts in the wells ...
