单抗制备流程 1 ９７ 5 年,K ｏｈ ler 与 Mil ｓ t ｅ in 发现将小鼠骨髓瘤细胞与绵羊红细胞免疫得小鼠脾细胞进行融合,形成得杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上得突破不仅为医学与生物学基础讨论开创了新纪元,也为临床疾病得诊、防、治提供了新得工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞得克隆化、冻存以及单克隆抗体得大量生产,要经过几个月得一系列实验步骤，下面根据制备单克隆抗体得流程顺序，逐一介绍其实验方法。一、细胞融合前准备 (一) 免疫方案 选择合适得免疫方案对于细胞融合杂交得成功,获得高质量得 McAb 至关重要.一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原得特性不同而定。 1、颗粒性抗原免疫性较强,不加佐剂就可获得很好得免疫效果。下面以细胞性抗原为例得免疫方案: 初次免疫 １×１０ 7/0、5ml ip (腹腔内注射) ↓ 2~3 周后 第二次免疫 1×1 ０ 7／０、５ ml ip ↓ 3 周后 加强免疫（融合前三天） 1×10 ７／0、5 ｍ l ip 或ｉ v(静脉内注射) ↓ 取脾融合 ２、可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂,常用佐剂：福氏完全佐剂,福氏不完全佐剂。要求抗原与佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水得乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水得状态。商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇,使沉淀得分枝杆菌充分混匀。 初次免疫 Ag １~５ 0μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射 │ （一般 0、8～1m ｌ 0、2 ｍ l／点) ↓3 周后 第二次免疫 剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或 i ｐ │ (i ｐ剂量不宜超过 0、5ml) ↓3 周后 第三次免疫 剂量同上，不加佐剂,ｉ p │ (5~７天后采血测其效价,检测免疫效果) ↓2～3 周后 加强免疫,剂量５０～５０ 0μg 为宜,ip 或 i ｖ ↓3 天后 取脾融合 目前,用于可溶性抗原（特别就是一些弱抗原）得免疫方案也不断有所更新,如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原得免疫原性,另一方面可降低抗原得使用量.② 改变抗原注入得途径,基础免疫可直接采纳脾内注射.③使用细胞因子作为佐剂,提高机体得免疫应答水平，促进免疫细胞对抗原反应性。（二) 饲养细胞 在制备单克隆抗体过程中,许多环节需要加饲养细胞，如:在杂交瘤细胞筛选、克隆化与扩大培育过程中,加入饲养细胞就是十分必...
