外源性DNA残留量测定法

重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体外源性 DNA 残留量测定法(ｑＰ C Ｒ法）1 原理实时定量Ｐ C Ｒ（ｑＰ CR)扩增分 2 个阶段，指数增长阶段与之后出现得非指数平台阶段。在指数增长阶段，每个循环Ｐ CR 产物量大约增加一倍。然而，随着反应得进行,反应体系组成成分得消耗，其中得一种或多种成分限制反应，产物增长速度变慢,反应进入平台期.反应最初，虽然产物呈指数增长，但就是荧光处于背景水平,检测不到荧光增加。但积累了足够得扩增产物，才可检测到得荧光信号，这个循环数叫初始循环数，即 CT。CT值主要由扩增反应体系中模板得初始浓度决定得。假如模板初始浓度高，只需要较少得扩增循环就可以积累足够得产物，产生高过背景得荧光信号，因此,反应就有一个小或早出现得 CT;相反,假如模板初始浓度低，需要较多得扩增循环才能产生高过背景得荧光信号,反应就有一个大或迟出现得CT。两者之间关系得建立就是 qP ＣＲ用于定量得依据。2 主要仪器表 2 仪器信息表名 称厂 家型 号实时定量Ｐ CR 仪Ｂ i ｏ-RadＣ F Ｘ C ｏ nne ｃ t3 主要试剂表 3 试剂信息表名 称厂 家规 格残留 DNA 样品制备试剂盒AB Ｉ1） Ly ｓ is Ｂ uffer,２ bo ｔ tl ｅｓ，5 ０ m ｌ/bott ｌe；2） Bi ｎ di ｎｇ Solut ｉｏ n，1 em ｐ t ｙ ｂ o ｔ tle;3） Wash B ｕ ff ｅｒ Ｃ once ｎ trate， 2 bottles， 2６ ｍ l/b ｏ ttl ｅ;4） Elu ｔ i ｏ n Buff ｅ r； 1 ｂ ot ｔ le， ２ 5m ｌ;5） Pro ｔｅ in ａ se Ｋ (PK） Buf ｆ e ｒ， 1 bottle, 50ml；6） Magn ｅ tic Ｐ art ｉ cles， 2 ｔ ub ｅ s， 1、５ mｌ/ｔｕ b ｅ；7） Protein ａ se Ｋ , 2 t ｕ bes, 20 mg/m ｌ , 1、25 m ｌ;8） Ｙ east tR Ｎ A, 2 tu ｂ e ｓ,10mg/ml，0、5ml；Glycog ｅ n， 2 tubes,5m ｇ/ml,1、0ml／ｔ ub ｅ、残留 DN Ａ定量检测试剂盒（CHO）AB Ｉ1)DNA Ｃ ontro ｌ,1 bo ｔ t ｌｅ，40μl；2)DNA Di ｌ utio ｎ Buffer（DDB），1 b ｏ tt ｌe，７ ml；3)2×Environm ｅ n ｔ al Maste ｒ M ｉ x, ２ ｔ ubeｓ，０、75m ｌ/tub ｅ；4)1 ０×D ＮＡ Resl－Time PC Ｒ Ａ ssa ｙ Mix， 1 tｕ b ｅ,300μl;5) Ne ｇ at ｉ v ｅ Con ｔ rol...