山东大学实验报告 2 ０ 17 年 １ 2 月 4 日 ＿__＿＿__＿___＿_＿_____＿______＿ 科 目:微生物学实验 题目:微生物鉴定常用得生理生化试验 姓名:丁志康一、目得要求1、证明不同微生物对各种有机大分子得水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同得酶系统。2、掌握进行微生物大分子水解试验得原理与方法。3、了解糖发酵得原理与在肠道细菌鉴定中得重要作用。4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物得方法.5、了解 I Ｍ Vi Ｃ反应得原理及其在肠道细菌鉴定中得意义与方法.二、基本原理１、生物对大分子得淀粉、蛋白质与脂肪不能直接利用,必须靠产生得胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶只要为水解酶，通过加水裂解大得物质为较小得化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子得糊精、双糖与单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油与脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程均可通过观察细菌菌落周围得物质变化来证实；淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉得区域,用碘测定不在产生蓝色,表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培育基得 p Ｈ，使 pH 降低,加入培育基得中性红指示剂会使培育基从淡红色变成深红色，说明胞外存在着脂肪酶。2、糖发酵试验就是常用得鉴别微生物得生化反应,在肠道细菌得鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源与能源，但就是它们在分解糖类物质得能力上有很大得差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳糖、醋酸、丙酸等）与气体（如氢气、甲烷、二氧化碳得等）;有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖与葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气,不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气,不能分解乳糖。发酵培育基含有蛋白胨，指示剂(溴甲酚紫)，倒置得德汉氏小管与不同得糖类。当发酵产酸时,溴甲酚紫指示剂可由紫色(p Ｈ 6、8）变为黄色(ｐ H5、2）。气体得产生可由倒置得德汉氏小管中有无气泡来证明。3、I Ｍ ViC 反应就是吲哚试验、甲基红试验、伏－普试验与柠檬酸试验 4 个试验得首字母缩写。这四个实验主要就是用来快速鉴别大肠杆菌与产气杆菌,多用于水得细菌检查。（1）吲哚试验：某些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨中得色氨酸形成吲哚(靛基质），吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。(2)甲基红试验:某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等，使培...
