细胞生物学实验报告细胞原代培育 姓名： 学号： 班级: 专业： 同组成员：一、实验原理 细胞培育就是生物学与医学讨论中最常用得手段之一，可分为原代培育与传代培育两种。原代培育就是直接从生物体猎取组织或器官得一部分进行培育。由于培育得细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内得生活状态。这一方法可为讨论生物体细胞得生长代谢、繁殖提供有力得手段.同时也为以后传代培育制造条件。 原代培育得方法： 1、组织块法 在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于 1mm ３大小.用 Hａ nk ｓ液洗涤 2—3 次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培育瓶进行培育。 2、酶消化法 将 1mm3 大小得组织块放入 1 个三角瓶内加入 10—30m ｌ得 0、125％得胰蛋白酶。370 Ｃ磁棒搅拌消化２ 0－３０分钟.然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液,离心８ 00rpm 5—１ 0 分钟收集细胞。弃上清,加入带有双抗得培育基，放入培育瓶培育 。 取材注意事项: 取材要注意新奇与保鲜.取材应严格无菌。取材与原代细胞制作时，要用锐利得器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞得机械损伤.要认真去除所取材料上得血液(血块)、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避开组织干燥，可在含少量培育液得器皿中进行。 取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培育,分化低得较分化高得组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培育。 二、实验目得１、理解细胞原代培育原理２、熟悉细胞原代培育方法与过程3、了解细胞原代培育得应用４、独立进行细胞原代培育操作三、实验材料手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培育瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75％酒精棉球、酒精灯。动物：9—12 日龄得鸡胚蛋四、实验步骤１、购买 9－12 日龄鸡胚蛋。放入孵化箱中孵养待用。２、取鸡胚蛋一枚放入超净工作台中，用酒精棉球擦拭鸡蛋壳后，气室处擦拭两遍,用镊子小心去除气室部分得蛋壳。３、取Ｄ－ha ｎ ks 液按 1:10 ０加入双抗。４、换用洁净得无菌镊子揭开膜，再用洁净得无菌弯头镊子取出鸡胚至灭菌得培育皿中，并用 D—ｈ an ｋ s 液冲洗鸡胚三遍.5、用眼科剪去除鸡胚得头部、四肢以及内脏，然后用Ｄ—ｈ anks 液充分洗涤躯干部分三遍.6、将洗涤过得躯干移至洁净得培育皿,吸去多余得液体，然后用眼科剪将躯干充分剪碎(约四分之一米粒大...
