不同金属离子对酶活性的影响

不同金属离子对酶活性的影响(4 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。金属离子对酶活性的影响实验目的：1、了解金属离子对酶活性的影响； 2、掌握不同金属离子对酶活性作用结果的测量方法实验原理：酸性磷酸酯酶广泛分布于动物和植物中，植物的种子、霉菌、肝脏和人体的前列腺中。它对生物体核苷酸、磷蛋白和磷脂的代谢，骨的生成和磷酸的利用，都起着重要作用。磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如 ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。本实验选用绿豆芽作材料，从中提取酸性磷酸酯酶。以人工合成的对硝基苯磷酸酯（NPP）作底物，水解产生对硝基苯酚和磷酸。在碱性溶液中，对硝基酚盐离子在 405nm处光吸收强烈，而底物没有这种特性。凡是能提高酶活性的物质统称为酶的激活剂。无机离子和一些金属离子对酶有激活作用，可以作为酶的激活剂。其中钾离子是酸性磷酸酯酶的一种激活剂，它在酶与底物之间起了桥梁作用，形成了酶—金属离子—底物三元复合物，从而更有利于底物与酶的活性中心部位的结合。而氯离子和钠离子对酸性磷酸酯酶的活性没有什么影响.一些重金属离子如铜离子，对酶活性具有抑制作用。实验用品：1、 仪器：恒温水浴箱、试管架、试管、分光光度计、比色皿、吸头、滴管、移液枪、移液管2、试剂：1.2mmol/L NPP 100ml 、 0.3mol/L NaOH 250ml 、 酸性磷酸酯酶、 pH5.0 的柠檬酸缓冲液 1000ml 、2mmol/L FeSO4 、2mmol/LCuSO4、MnCl22mmol/L 、MgSO42mmol/L、 KCl 2mmol/L EDTA、实验步骤：调零FeSO4 CuSO4MnCl2MgSO4EDTAKCl空白对比01234567NPP（ml）11111111酶液(ml)11111111金属离11111111子 （ml）NaOH(ml)33333333注：反应均在 37 度水浴箱中进行， 0 号管先加入1.0mlNPP 后保温 15 分钟，然后加入 NaOH 3ml，混匀后再加酶液 1ml，在波长 405nm 处观察 OD 值，以 0 号管调零实验结果调零FeSO4 CuSO4MnCl2MgSO4EDTAKCl空白对比试管号01234567OD（abs）00.6840.3091.2620.3570.3410.3420.284 由实验数据得到的图标如下： 实验作业：以各金属离子为横坐标，A405 纵坐标，绘制不同金属离子与酶活力曲线，观察金属离子与酶活力的关系，分析哪些是酶活性激活剂，哪些是酶活性抑制剂。结果分析：通过实...