内含子和外显子的位置(9页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。偶最近也在做 RT-PCR。也正在设计跨内含子的引物。在园子里看了些文献，也请教了一些人。个人感觉主要是你找到这个基因的具体的内含子和外显子的位置后再设计引物一点也不难。只要在跨越的引物中选取条件好的就行了。其中对于如何找到内含子和外显子，偶是用以下的方法。一、首先登录 Pubmed 找到你的基因序列，这个应该很简单。偶不多说。二、如下图进入 Blastl 界面，选取 genomes 中的相应物种。 三将你的序列拷贝到查询框中，进行查询（Begin search)。然后点击 format，一路点下去，出现下图样的对话框。点击 genome view 然后点击其相应的染色体号，我查的是 HIF 基因，在 14 号染色体上。相应的染色体上会出现红色的标记。 好了，如下图。你可以看到右边的这些方框最后给的序列，就是外显子的序列。你可以对着此来设计引物，找到哪些跨过内含子的引物。 首先要明白：RT-PCR 的引物之所以要跨内含子设计，主要原因就是为了避开再 PCR 过程中基因组 DNA 的影响。那么其实只要在提 RNA 时除去 DNA 也就没什么关系了。RNA 沉淀之后，在 100ul 反应体系中用 RNAse free 的 DNAseI37C 处理 0.5h，然后直接用100ul 氯仿抽提，异丙醇（别忘了加 1/10 体积 4M NaAc）再次沉淀后用适量 DEPC 水溶解即可。NCBI>GENE>基因名称搜索 (Click the picture to see the source) louischen Posts: 518 Score: 43 2025-07-30 06:57点击基因名称进入 左键击 NC_000019>GRAPHICS intron，extron 的排列，可以点击进入 粗划线为外显子，并有对应的 protein 编码 还在 http://www.ensembl.org/也可以，在主页上输入基因的名字，找出该物种的基因序列，在 transview 和 exonview 上可以看到外显子和内含子，此网页简单，得到不同颜色标记的外显子。 …#、$】{【*，&…%；*$}~:》》/*;#$、：【-)
