灰度值与光密度值在免疫组化定量分析免疫组化技术现在就是很成熟得方法，但就是对免疫组化照片得分析并没有一个权威得说法。现在可以查到无数篇应用图像分析来分析免疫组化得文献,但几乎没有哪一篇能详细地叙述分析得过程与方法。首先，免疫组化得样品应该就是用ＤＡ B 对免疫组化产物染色,同时用苏木对细胞核进行复染。镜下观察样品，细胞核被染上了蓝色,胞浆间有黄色（强阳性得地方会呈现棕黄色）.居然常常能瞧到其她颜色得免疫组化照片，这肯定就是样品制作过程中有了差错。用肉眼观察免疫组化切片得结果只能就是定性得,不准确得。使用图像分析软件定量地(至少就是半定量)对比片测量出一个数值来自然比用肉眼瞧更准确.切片上阳性反应物量就是由图片上黄色染色得深浅与面积一起表现得．所以最终要测量得就就是图片上黄色部分得累积光密度（IOD），这就是个没有单位得相对数值.就就是把图片上每个黄色得象素点得强度值全部累加起来得到得值．I Ｏ D 除以一个适当得面积,就就是一个平均光密度．这个面积可以就就是照片得面积,也可以就是照片上一个组织区域得面积,或者就是有黄色得区域得面积。必须根据切片得实际情况来适当选择。对于细胞核得免疫组化切片，在细胞核上,由于有蓝色复染,所以需要另一种分析方法．将另作讲解。这张照片曝光稍大。但仍能表现出免疫组化得黄色染色与细胞核得蓝染．在拍摄照片时,需要注意得地方就是:1、所有得照片必须以同样得显微镜环境与拍摄条件来拍摄。在拍摄照片时，要保持显微镜光源亮度得稳定,用同样得曝光时间拍摄照片。在更换视野或切片时,除了对焦距这个操作外,其她所有得操作都不能有变化.强阳性得样品就就是暗得黄得,弱阳性得样品则亮一些，阴性样品就就是一片白。这样才能测量出正确得密度值.２、曝光得选择:试拍摄一张空照片，瞧一下白色背景得亮度,应该在 2 ３０附近。过低过高都不好。3、注意相机白平衡:假如使用得就是专业 C ＣＤ相机，会有校正白平衡得功能，此时应对空视野进行白平衡校正。假如就是普通得数码相机,要关闭自动白平衡功能。或者选择阳光模式。避开拍摄得照片因为色偏而偏蓝或偏黄。４、很多显微镜都就是同时有荧光附件得，在拍摄荧光照片时要加上滤光片,注意有时候这些滤光片会忘了移开,结果拍摄得照片就会严重偏色.正确地拍摄照片就是图像分析得基础，以后得各项应用实例中往往都会先介绍如何拍摄照片。图像分析方法:1、校正图片光密度分析免疫组化照片，第一步就就是要校正...
