实验一_鸡新城疫血凝和血凝抑制抗体水平测定法

鸡新城疫血凝(HA)与血凝抑制(HI）抗体水平测定法１.本次实验得目得与要求掌握鸡新城疫血凝（Ｈ A)与血凝抑制（HI）抗体水平测定法,以便检查疫苗使用效果与制定合理免疫程序.２.实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等）能够与动物得红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(H Ａ）。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（HI)。３．需用得仪器或试剂等动物 健康成鸡 2-5 只,被检鸡１ 5—2 ５只。器材 高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径 2mm 聚乙烯塑料管 100cm、酒精灯、石蜡、96 孔 V 型微量凝集试验板、0．02 ５ mm 微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。药剂（１)浓缩抗原;(２)生理盐水或磷酸缓冲盐水(P Ｂ S)；(3）Als ｅ ver 细胞保存液；(4)红细胞悬液;（5)待检血清4。实验步骤（１)发现与鉴定病毒：鸡新城疫与禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡得红细胞，又能被特异性得已知免疫血清抑制其凝集反应,即可鉴定此病毒。 (２）诊断病毒性疾病:如取同一发病得动物早期与恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验,如抗体效价有 4 倍以上升高，即有诊断意义.(3)免疫机体抗体效价得测定： ３、鸡新城疫(ND)得 HA 与 HI（1）试验准备 ① 抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或 LaU ｒａ系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ② ０、7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血,放入含有抗凝剂得灭菌试管(按每毫升血加入３、8%灭菌柠檬酸钠０、２毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用,可直接采血放入红细胞保存液内（保存液 2 份，血液 1 份）于 4℃冰箱内可保存两周。红细胞悬液得配制：将血液注入离心管中,经３ 0 ０ 0 转／分钟，离心５－10 分钟,用吸管吸去上清液与红细胞上层得白细胞薄膜，将沉淀得红细胞加稀释液(生理盐水）洗涤。再用离心机 3000 转/分钟离心５—1 ０分钟，弃上清,再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次,将最后一次离心后得红细胞泥,按 0、7%得稀释度加入稀释液（0、7 毫升红细胞泥加９ 9、3毫升稀释液）。 ③ 被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过得干燥注射器采血,注入干净干燥试管内(微量法可用孔径 2—3 毫米塑料管由翅静脉采血），在室温中静置或离心，待血清析出后使用。每只鸡应更换一个注射器,严禁交叉使用。④ 稀释液:为灭菌得生理盐水.⑤ 红细胞保存液得配制方法：葡萄糖２。05 ...