动物源性饲料中骆驼源性成分 定性检测方法 PCR 方法Identification of Camelidae derived materials in animal-on 梦 nated feedstuffs-PCR method本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国检验检疫科学讨论院、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:陈颖、吴亚君、徐宝梁、王晶、曹际娟、高雄伟、宗卉、黄文胜、袁飞、赵贵明。本标准首次发布。1.范围本标准规定了动物源性饲料方法，该检测方法的检出限为 0.工%(质量分数)。本标准适用于动物源性饲料成分中骆驼源性成分的的定性检测。2.法律规范性引用文件5 试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂口实验用水符合 G13 }E82 的要求口5.丁骆驼源性成分检测用引物(对)序列为: F: }'-AGCCZ'TC.TCTTCAC}TCGCACAC-3’ R:a'-GCCCATGAAAGCTGTTGCT 一 3’5.2 TaqL3}fA 聚合酶(Tuq,Thermus aq}aticu，水生栖热菌)。5，3 限制性内切酶. Tu q I 酶。5. a a} TPS:dATPC deoxyadenosine tphate ， 脱 氧 胸 昔 三 磷 酸 ),dCTP(deoxycytidine triphosphate，脱氧胞昔三磷酸)、dGTP ( deoxyguanosinetriphosphate，脱氧鸟昔三磷酸)。5. 5 琼脂糖:电泳纯。5. 6 澳化乙锭。5. 7 三氯甲烷。5. 8 无水乙醇。5. 9 70%乙醇。5. 10 DNA 分子量标准品(10a by 一 800 bp) (bp; base pair,碱基对)口5. 11 裂解液;1 写 CTAB(cetyltrithylammonium bromide，十六烷基三甲基滨化按)，0. 05 mol/L Tris-HCI(pH 8.0)[Tris-;tris (hydroxymetlzyl) axninomethaxae ， 三 ( 经 甲 基 ) 氨 基 甲 烷 },0. 7 mol/L NaCI,0. 01 mol/L EDTA (pHB. 0) (ethylene diaxxiinetetraacetic acid，乙二胺四乙酸)。5. 12 TE 缓冲液(Tris-HCI,EDTA 缓冲液):10 mmol/L Tris-HCl (pHB. 0)，1 mmol/L EDTA (pH8. 0 )。5. 13 l0 X PCR 缓冲液:100 mmol/L I}C1,160 mmol/L (NH4)ZS04,20 mmol/L Mg50},200 mmol/LTris-HCl (pHB. 8),l0a Triton X-100(t-octylphenoxypolyethoxyethanol，辛基苯氧基聚乙氧乙醇)，1 mg/mL BSA(bovine serum albumin，牛血清蛋白)。5. 14 电泳缓冲...
