包涵体纯化蛋白复性得方法操作流程返回:包涵体复性常见问题分析与解决包涵体得纯化与复性总结包涵体折叠复性得方法应具备以下几个特点：较高得活性蛋白质回收率;复性产物易于与错误折叠蛋白质分离；折叠复性后能够得到较高浓度得蛋白;折叠复性方法易于放大等.蛋白复性得过程通常分为以下几个步骤:包涵体得洗涤包涵体在溶解之前需要进行洗涤，包涵体中主要含有重组蛋白,但也有一些杂质，如一些外膜蛋白、质粒 DN Ａ等，这些杂质会与包涵体粘连在一起，可以通过洗涤去除大多数杂质，但无法将杂蛋白去除洁净。包涵体得洗涤通常选用浓度较低得变性剂,如 2 Ｍ尿素在 50mM Tris，ｐ H7、0-8、5，1m Ｍ E Ｄ TA 中洗涤包涵体.此外可以用温与去垢剂 Trito ｎＸ—10 ０洗涤去除膜碎片与膜蛋白.同时，因为去垢剂得洗涤能力会随溶液离子强度升高而加强，所 以在洗涤包涵体时可加入低浓度得尿素或高浓度得 NaCl,使包涵体得纯度达到 50%以上.包涵体得溶解变性剂如尿素、盐酸胍，主要就是通过离子间得相互作用，打断包涵体蛋白分子间得各种化学键，使多肽延伸。盐酸胍就是较尿素强得变性剂,它能溶解尿素不溶得包涵体。ＳＤ S、正十六烷基三甲基铵氯化物、S ａ r ｋ os ｙｌ等也可以破坏蛋白内得疏水键，溶解一些包涵体蛋白质.另外,从某些含有半胱氨酸得蛋白质中分离出得包涵体,通常含有一些链间形成得二硫键与链内得非活性二硫键,这就还需加入还原剂,如巯基乙醇、二硫基 苏糖醇(DT Ｔ)、二硫赤藓糖醇、半胱氨酸等。这种还原性试剂能够同半胱氨酸形成各种二硫化物中间体,也会被复性用得二硫化物置换试剂所取代。二硫键得形 成与断裂就是可逆得,直到最有利得蛋白二硫键形成,这个平衡才会被破坏。常用变性剂对比尿素（8-10Ｍ)较盐酸胍慢而弱，溶解度为 70—90％用尿素溶解具有不电离,呈中性,成本低,蛋白质复性后除去不会造成大量蛋白质沉淀ﻫ溶解得包涵体可选用多种色谱法纯化盐酸胍(６—8M）溶解能力达 95%以上，且溶解作用快而不造成重组蛋白质得共价修饰成本高、在酸性条件下易产生沉淀、复性后除去可能造成大量蛋白质沉淀ﻫ对蛋白质离子交换色谱有干扰包涵体得复性复性就是指通过去除变性剂使目标蛋白从完全伸展得变性状态恢复到正常得折叠结构，同时去除还原剂确保二硫键正常形成.一般在尿素浓度４ M 左右时复性过 程开始，到２ M 左右时结束；盐酸胍可以从 4M 开始,到１、5M 时结束.复性方法主要采纳稀释复性，透析复性...
