环境中微生物的检测和分离纯化生 72 伍国羽 2025012357组别 周四班 2-1-1实验同组人：王甦实验时间 2025 年 4 月 16 日实验目的1)熟悉常用微生物培育基配制与灭菌方法和原理;2)掌握微生物的分离,纯化;3)用平板划线法和稀释法分离微生物;4)认识微生物存在的普遍性，理解无菌操作原理.实验原理微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各种微生物生长繁殖的大本营。空气里悬浮着无数细小的尘埃和水滴，它们是微生物在空气中的藏身之地。各种水域中也有无数的微生物。居民区附近的河水和浅井水容易受到各种污染，水中的微生物就比较多。大湖和海水中，微生物较少。从人和动植物的表皮到人和动物的消化道，也都常常生活着大量的微生物。平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培育，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。实验器材实验材料: 菌源:土样 10g，大肠杆菌；牛肉膏蛋白胨培育基 24 个；实验仪器: 取液器:1000ul 、200ul 各一支，培育箱；实验试剂: 0.9% 无菌生理盐水，250ml 三角瓶中装 99ml 生理盐水，每瓶加约 20 粒玻璃珠；250ml 三角瓶中 99ml 生理盐水，作 100 倍稀释用。实验用具：平皿，涂棒，无菌 200ul，1000ul 吸头，记号笔，酒精灯。实验步骤1)采土样：选择肥沃土壤,去表层土,挖 5~20cm 深度的土壤数 10g,装入烧杯,带回实验室;2)制备土壤稀释液;称取土样 1.0g， 放入盛 99ml 无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手振荡 5min 使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。(全班统一做 1 份,分到每个小组 1ml)。用 200ul 的无菌吸头从中吸取 0.1ml 土壤悬液，注入事先分装有0.9ml 无菌水的试管中，吹吸 3 次，摇匀（10-3）。类推制得 10-4、10-5、10-6的土壤悬液。3)涂布。用无菌吸头，分别吸取 10-6 、 10-5 、 10-4浓度土壤稀释液 100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培育基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做 3 个平板，编号为 1、2、3。4)涂板。单菌落划线（2 块）：用接种环挑取大肠杆菌液，做单菌落划线分离，每人 2 板。手指（1 块）：分别用未洗过的手指头, 用自来水打湿的手指头，用自来水洗过的手指头，用洗手液洗过的手指头 (不用毛巾擦)在同一平板的不同分区...
