生技 11、专升本 13 发酵实验方案实验一 中草药栀子活性成分京尼平苷转化菌筛选（细菌）1.原理：利用京尼平苷经 β-葡萄糖苷酶水解后产生京尼平与谷氨酸反应生成蓝色。通过平板颜色变化来推断是否存在产 β-葡萄糖苷酶的菌株。2.材料与仪器：2.1.主要仪器设备：超净工作台、电热恒温培育箱、电子天平、250ml 三角瓶、培育皿、移液管、移液枪、移液枪盒、蓝盖瓶、涂布棒、接种环（针）、1000ml 烧杯、100ml 烧杯、玻璃棒、离心管、高压灭菌锅、镊子2.2.原料与药品：栀子、谷氨酸、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠培育基：分离筛选培育基：牛肉膏蛋白胨培育基 鉴定培育基：牛肉膏蛋白胨培育基+栀子+谷氨酸3.实验方法：3.1.β-葡萄糖苷酶的菌株筛选3.1.1.富集培育（初筛）（牛肉膏蛋白胨培育基）：3.1.1.1.实验准备：3.1.1.1.1.收集产酶菌株可能存在的样品：中药港采集新奇土样、栀子在土里培育发霉的土样3.1.1.1.2.仪器灭菌：将培育皿、移液管、涂布棒、移液枪头、蒸馏水等灭菌3.1.1.1.3.煮栀子浸提液：称量已粉碎栀子，加适量水煮一个小时，纱布过滤收集滤液，重复煮三到四次煮，将几次煮的滤液混合，滤液收集体积与栀子称量的量为 10:1。3.1.1.1.4.配制牛肉膏蛋白胨培育基按培育基配方称好，琼脂，加热溶化，分装，121 摄氏度高压灭菌 20min，倒平板。3.1.1.1.5.用梯度稀释法来分离产生菌：取所采的土样 5g，加入到装有 45mL 无菌水的三角瓶中，振荡 5min，制成土壤悬液，此时的稀释度为 10-1。另取 7 支试离心管，分别记作 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8 共 8 个梯度，每支离心管内加入 9mL 无菌水。用无菌移液管从三角瓶中吸取 1mL 土壤悬液，加入到 10-2 离心管中混匀，再从此试管中吸取 1mL 加入到 10-2 离心管中，依此类推直至 10-7 离心管。分别从 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8 七个稀释度的离心管中吸取 100uL 悬液，均匀涂布于分离培育基平板上，于 30℃培育。24h 后观察现象。3.1.2.复筛3.1.2.1、鉴定培育基复筛称取谷氨酸（培育基的 1%，在超净工作台灭菌 20min）加入到牛肉膏蛋白胨培育基中充分溶解，吸取栀子浸提液（培育基的 10%）到培育基中摇匀，倒平板。将上述富集培育的菌种涂布或划线或点种到鉴定培育基上，培育 24h 后观察变色圈。3.1.2.2、分离纯化将有透明圈的菌株挑出分离纯化实验二、菌种的保藏和活化一、目的和要求 1、了解各种保藏方法的优缺点...
