线虫开放实验的补充说明VIP专享

线虫开放实验的补充说明1. 培育基倒培育基一定在超净台中完成，注意无菌操作，平板不能高压灭菌，会变形。2. 线虫的食物滴菌同样在超净台中完成，菌滴于平板中央（防止线虫爬到平板边缘干死），并且要进行测试无杂菌才可大规模使用，污染杂菌会影响观察和统计记录。3. 线虫的生活史和表型观察（重要）“磨刀不误砍柴工”这两部分是整个线虫遗传实验最重要的基本知识。需要记录并熟悉线虫的生活史。熟知不同阶段的线虫（特别是 L4 和 adult），区分雌雄同体线虫（hermaphrodite）和雄虫（male），识别典型的突变体：unc 和 dpy。4. 线虫的基本实验操作（重要）熟练使用 picker(自制铂金丝小铲)，达到如下要求：1） 注意操作迅速，洁净，不污染杂菌，及时烧 picker，防止交叉污染虫子和卵；2）转移虫子不挑破培育基，不使虫子被挑死；3）挑虫准确性强，不顺带别的虫子和卵；4） 要做到“挑的起”，“放的下”，掌握挑虫技巧。5. 线虫的遗传实验技巧1） 掌握 mating 时期：充分利用 L4 的特点，使用 L4 早期的雌雄同体的虫子进行交配。2）铺 op50 食物菌斑时，建议铺菌斑较小的平板作为 mating plate，提高交配效率，另外雄虫比例较高时也可提高交配效率（尝试不同的比例）。3）Mating 时，准确记录亲本数目，一定在 F1（子一代）到 L4 之前处死 P0(亲本)中的雄虫，防止回交，并且之后及时处理 P0 中的雌雄同体虫和长大的 F1（有的实验需要及早 clone out，单虫单盘培育）,防止影响统计的准确性。4）利用线虫生长速度合理安排时间，比如 15℃生长较慢，25℃生长较快。5）开始学做交配时，可以同时做几盘平行组，保证成功率，节约时间。6. 线虫临时保存方法（1-2 个月）实验初始，保存实验所需线虫于 10℃备份，每种两盘。当平板上的菌被吃完，小虫（L1，L2）较多时，处于 starve 状态，这个时候是冻存的最佳时期，成活率最高。平常传代频率太高，浪费平板。