Hela 细胞的传代培育及 HE 染色生 05 边晔 2025030026周二班 同组同学：解智博一、实验背景1.组织培育1)动物细胞组织培育：从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温柔丰富的营养条件下，使离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的技术。2)原代培育、传代培育：原代培育是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培育。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培育，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，但实际上，通常把第一代至第十代以内的培育细胞统称为原代细胞培育。当原代培育成功以后，随着培育时间的延长和细胞不断分裂，需要将培育物分割成小的部分，重新接种到另外的培育器皿（瓶）内，再进行培育。这个过程就称为传代培育。3)培育条件：基本营养物质、生长刺激因子、水、温度、气体和氢离子浓度、无菌的环境（无菌操作）、其它（湿度、光等）4)细胞可悬浮型、贴附型生长。本实验 Hela 细胞为贴附型生长。5)细胞生长周期：游离期、埋伏期、对数生长期、平台期、衰退期。2.Hela 细胞系Hela 细胞是生物学与医学讨论中使用的一种细胞，源自一位美国妇女海莉耶塔‧拉克斯（Henrietta Lacks）的子宫颈癌细胞的细胞系HeLa 细胞贴壁生长，属于上皮细胞型。3.HE 染色H•E 染色法是组织细胞染色中常用的一种方法，H 指苏木精（Hemataxyln），E 指伊红（Eosin）。细胞经苏木精染液染色后，细胞核、粘液等呈蓝色，细胞质及其他成分不着色或着色较浅，且易褪色。苏木精染色后，用盐酸酒精分化及弱碱性溶液返蓝，细胞核呈深蓝色，而细胞质等不着色。再用伊红染细胞质，使细胞质中的各种成分呈现深浅不同的粉红色。二、实验步骤1. 细胞传代培育1) 洗手，戴手套，进细胞间，75%酒精喷手，将超净台准备好。2) 取 Hela 细胞（35mm 平皿中培育）镜检，观察细胞形状、数目、密度、污染状况等。3) 吸弃皿中的培育基，再加入 1ml PBS 溶液洗去残余培育基，弃掉培育皿中液体。4) 向培育皿内均匀滴加 200l 消化液，放入 37ºC 培育箱中消化 3 分钟。5) 取出培育皿，加 500l 含 10％血清的 DMEM 培育基，用枪头抵住培育皿底反复多次吹吸，直到镜检细胞基本上不再聚集在一起，分散均匀为止。6) 取 300l 皿中液体加到一新的培育皿中，补加 DMEM 培育基至总体积为 1.5ml 为止。标记，放入 1 号培育箱中传代用于第二天 HE 染色。7) 原培育皿中也补加 DMEM 培育基至总体积为 1...
