传代细胞培育以及染色生 31卢文2025012377【实验目的】1.掌握细胞传代培育的原理和方法；2.掌握传代细胞染色的方法。【实验试剂和材料】实验用试剂PBS 缓冲液（无 Ca2+、Mg2+）：pH 为 7.2 至 7.4。培育液：DMEM+10%NBS（血清）+1%双抗（100×，即 10000U/mL 的青霉素与链霉素混合剂）。pH 约 7.2。消化液：0.25%胰蛋白酶（trypsin）+1mmol-1EDTA 混合液。Carnoy 固定液（冰醋酸:无水乙醇＝1:3），苏木精染液（苏木精 0.5g，无水乙醇10mL，硫酸铝钾 25g，蒸馏水 150mL，完全溶解后，混合均匀，加热煮沸 3－5min，加入蒸馏水至 500mL，最后加入 0.1g 碘酸钠），伊红染液（0.5g 伊红B、100mL80%乙醇），0.5%盐酸酒精溶液（0.5mL 盐酸、100mL 70%乙醇），0.5%氨水。实验材料小平皿、自动取液器、酒精灯、火柴。【实验步骤】传代培育（全部步骤均在超净工作台操作）步骤：1.镜检，观察并记录细胞状态。2.吸弃培育基，加入 1mL PBS 溶液洗去残余培育基。3.加 200uL 胰酶－EDTA 溶液，37ºC 消化 1－2 min。4.加 800uL 含 10％血清的 DMEM 培育基（终止消化、悬浮细胞）。5.按比例分盘，进行传代培育。每盘细胞密度一致，细胞分散均匀。6.37ºC、5％CO2 培育。细胞染色（在实验台进行）步骤：1.显微镜下观察细胞形态（4×10 倍），绘图。2.吸弃旧的培育液，用 PBS 荡洗一次。3.用 Carnoy 固定液固定 3min。4.吸弃固定液，用蒸馏水荡洗一次。5.铁矾苏木精染色 10min。6.用流动的自来水洗涤一次，加入 0.5%的盐酸酒精溶液分色（数秒），再用流动的自来水水洗一次。7.加入 0.5%的氨水返蓝（作用于苏木精染剂），立即弃去。8.用流动的自来水洗一次，观察细胞染色效果。9.如效果较好加入伊红溶液染色，加入数秒后立即弃去。用蒸馏水洗涤次。10. 镜检，绘出细胞形态图并照相。细胞生长期观察（在缓冲间进行）步骤：细胞培育的 1 天后，从培育箱取出平皿，显微镜下观察细胞的数目、密度和形态情况。【实验结果】观察到的细胞贴壁和染色后图像见手绘图及图 1。苏木精-伊红染色之后，细胞核呈紫色，细胞质呈淡粉红色。图 1：染色结果在细胞培育的过程中，开始培育的一天后观察可见细胞已经开始增殖，镜下可见三至五个细胞团簇贴壁生长的景象。【实验小结与讨论】1.传代细胞的特点：传代细胞是指来自人或动物的肿瘤组织或者正常组织的细胞，其染色体组型进展为非整倍体或二倍体低于 75%。这种非整倍体细胞在...
