选做细胞转染边晔

细胞转染生 05 边晔 2025030026周二班 同组同学：解智博实验时间：2025 年 11 月 28 日周三一、实验背景1. 转染将大分子（DNA）转导至真核细胞中。2. 转染方法（主要从毒性，效率，成本考虑）1)重组 DNA 病毒感染法外源基因大小有一定限制；安全性较低2)显微注射法 不适合大量细胞的基因导入，一次操作只能转染一个细胞3)电穿孔高水平（50%或更高）的毒性4)DEAE-葡聚糖转染法仅限于瞬时转染5)脂质体转染法试剂较昂贵，毒性较大6)磷酸钙转染法试剂实验室即可配制，成本较低；需要熟练掌握操作技术和严格控制溶液的 pH，且对质粒 DNA 的质量要求高本次实验我用的是 VigoFect（阳离子化合物）转染法。阳离子的正电荷可以与细胞膜表面磷酸基团负电荷吸引，由胞饮导入细胞内。二、实验步骤1. 转染前，将前一天传代的 Hela 细胞的培育基换为 1.5 mL 无抗生素含血清的 DMEM 培育基。（细胞密度约60%）2. 2L Vigofect 加入 98L 生理盐水，总体积至 100L，室温放置 5min。3. 12.5L 质粒（EGFP），加入 87.5L 生理盐水，总体积至 100L。4. 将稀释的 Vigofect 分多次逐滴加入稀释的质粒中，每加一次便轻轻混匀，室温放置 15 min。5. 将上述溶液逐滴加入到 Hela 细胞的培育基中，重点在飞片处多滴几滴，细胞置于 37℃、5%CO2培育箱中培育。6. 24h 后荧光显微镜观察，拍照。注意事项：在整个转染过程中都在超净台操作。针对细胞的操作要轻柔，不要用液体直接冲击到细胞（除滴加转染混合液外）。三、实验结果24h 后（周四 10am）观察实验结果，拍照如下。未转染细胞成功转染细胞（这张好像忘了加标尺了，和上一张对比即可）图 1 Hela 细胞转染结果拍照由图中可以看出，还是有一部分细胞成功转染了外源质粒，转染效率还是可以的。由于质粒中含绿色荧光蛋白，该基因在细胞内表达，使细胞发出绿色荧光，可以作为细胞成功转染的标志。绿色荧光在整个细胞内部基本均匀，说明荧光蛋白在细胞内的分布基本均匀。不同细胞间的荧光强度有差别，这可能与转染效率不同有关，那些转染较少较晚的细胞荧光要相对弱一些。四、实验总结本次试验兼具传代，转染，荧光镜检，拍照等几个步骤，但总体来说还是比较简单。除了转染以外，其他几步都曾经做过，已经是比较熟悉了。大多数人用的是脂质体转染法，我用的是 VigoFect 和 EGFP 质粒。实验结果还算成功，绿色荧光也很漂亮。通过这次实验，了解了细胞转染的一些知识，对课本上的内容有了更直观的了解，感觉收获不小。五、参考文献1.老师 PPT