PCR 技术的过程和意义一、PCR 技术的基本原理类似于 DNA 的 天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 是一种体外 DNA 扩增技术，是在模板 DNA、引物和 4 种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于 DNA 聚合酶的酶促合反应，将待扩增的 DNA 片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火—-引物延伸"三步反应的多次循环，使 DNA 片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。在环境检测中,靶核酸序列往往存在于-个复杂的混合物如细胞提取液中，且含量很低，对于探测这种复杂群体中的特异微生物或某个基因，杂交就显得不敏感。使用 PCR 技术可将靶序列放大几个数量级,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量讨论分析微生物群体结构。二、PCR 技术的步骤PCR 由变性-—退火—-延伸三个基本反应步骤构成：1、模板 DNA 的变性模板 DNA 经加热至 93℃左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2、模板 DNA 与引物的退火(复性)模板 DNA 经加热变性成单链后，温度降至 55℃左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合；3、引物的延伸DNA 模板-—引物结合 物在 TaqDNA 聚合酶的作用下,以 dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链,重复循环变性——退火-—延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板.每完成一个循环需 2～4 分钟,2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau）所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。 三、PCR 技术的意义1、特异性强PCR 反应的特异性决定因素为:① 引物与模板 DNA 特异正确的结合；② 碱基配对原则；③Taq DNA 聚合酶合成反应的忠实性；④ 靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的.聚合酶合成反应的忠实性及 TaqDNA 聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合（复性）可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高.2、灵敏度高PCR 产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12）量级的起始待测...
