T淋巴细胞亚群检测操作程序

一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中 T 淋巴细胞亚群检验的工作质量,旨在保证正确的 T 淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度.二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:质量主管、授权人（科主任）,方可改动.三、适用范围：外周血中 T 淋巴细胞亚群的绝对计数检测.四、实验原理：人的 T 淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导 T 细胞和抑制/细胞毒 T 细胞。辅助/诱导 T 淋巴细胞表达 CD3 和 CD4；抑制/细胞毒 T 细胞表达 CD3 和 CD8。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把 T 淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。六、主要试剂：CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45—PC7 (美国 BCs 公司;CAT: IM3548）,七、实验操作：1、标本采集：使用 EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血 2ml。2、染色和固定细胞:（1） 标本管编号 A，取一只流式专用管 A1.（2） A1 管加入 CD4—FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45—PC7 20ul。（3） A1 管中再加入全血 100ul，混均。（4） 置室温，避光孵育 15min。（5） 加入 FACSLysing 溶血液 2。0ml，置室温，避光孵育 10min.（6） 300g 离心 5min，弃上清液。（7） PBS 洗涤细胞两次,300g 离心 5min，弃上清液。3、上机检测；分析结果;打印实验报告。八、参考值：总 T 细胞（CD3+）： 59。4-84.6辅助/诱导 T 细胞（CD3+CD4+）: 28。5—60。5抑制/细胞毒 T 细胞(CD3+CD8+）： 11.1-38.3Th/Ts: 0.9—3。6九、临床意义：T 淋巴细胞可以分为辅助/诱导 T 细胞和抑制/细胞毒 T 细胞。测定 CD4和 CD8 可用于化疗、自身免疫病的免疫监视.在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于 CD8+细胞，导致 Th/Ts 比例显著下降。HIV 及某些病毒感染(EB 病毒、SARS 病毒等）患者 Th/Ts 比例也下降显著。十、质量控制:1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。2、健康人 CD4+细胞加 CD8+细胞总数应大约等于 CD3 总数；免疫病、淋巴瘤可能有较大差异。3、收集细胞太少（少于 500 个）、碎片污染太多（超过 10%）、门中淋巴细胞不纯（小于 90％）可能引起实验结果不正确.4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC 设门与 FSC-SSC 设门）减少杂质的干干扰.授 权 人质 量 主 管操 作 人 员生 效 日 期