丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书1. 目的采纳 PCR 技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的丙型肝炎病毒核酸的定性检测，适用于丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。2. 范围适用于丙型肝炎病毒核酸定量检测。3. 职责3。1 操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。3.2 专业组组长:负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作.3.3 实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。4。 原理采纳荧光 PCR 技术，以丙型肝炎病毒基因编码区的高度保守区为靶区域,设计特异性引物及荧光探针，进行一步法 RT—PCR 扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值(CT）实现对未知样本的检测.另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控,减少假阴性结果的出现。5. 样本要求5.1 适用标本类型：血清5。2 标本采集用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2 ml，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃)放置 30—60min 血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机,1500rpm 离心5min;吸取上层血清，转移至 1。5ml 灭菌离心管。5。3 标本保存和运送所采集的标本可立即用于测试或长期保存于-70℃，也可保存于-20℃待测，保存期为 3 个月，标本应避开反复冻融.标本运送采纳干冰（或者冰袋)保持低温，运输时间不应超过 4 天。5。4 拒收标本:拒绝重度溶血样本、肝素抗凝的血浆。6. 仪器和试剂6。1 设备AB7500 核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。6。2 试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号:YZB/国 7271-2025最低检出量：最低检出量为 500 IU/ml试剂各组分见表 1：表 1 试剂盒组分表组 分 名 称规 格数 量核酸提取试剂RNA 提取液 A200 ul/管1RNA 提取液 B5 ml/瓶2DEPC H2O3 ml/瓶1PCR 检测试剂HCV 内标溶液100 ul/管1HCV 反应液 A270 ul/管1HCV 反应液 B30 ul/管1质控品阴性质控品200 ul/管1HCV 强阳性质控品200 ul/管1HCV 临界阳性质控品200 ul/管17. 操作步骤7.1 试剂准备（试剂储存和准备区）7.1。1 进入试剂准备区,打开通风设备，根据消毒清洁程序擦拭实验台面，并在检验流程记录表上做相应记录。7.1.2 PCR 反应液配制7。1。2.1 取出 HCV 反应液 A、HCV 反应液 AB,室温溶化后振荡混匀，8000rpm 离心数秒后使用.7。1。...
