专题 2 微生物的培养与应用 课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数庖丁巧解牛知识•巧学一、筛选菌株1.PCR 技术是一种在体外将少量 DNA 大量复制的技术，PCR 技术的原理是：如果 DNA 片段两端的序列是已知的，那么采用 PCR 就可以很容易地将此 DNA 片段从整个 DNA 分子中扩增出来。进行 PCR 需要一段寡聚核苷酸链作为引物，它们各自与要扩增的靶 DNA 片段末端互补，引物与模板 DNA 相结合并沿模板 DNA 延伸，以扩增靶 DNA 序列。PCR 技术需要使用耐高温的 DNA 聚合酶，这种酶要能够忍受 93 ℃左右的高温。深化升华 PCR 的过程由三个基本反应组成：（热）变性、复性、延伸，这样构成一个循环的复制，新合成的 DNA 链又可以作为模板进行下一轮复制，重复 3 步操作。DNA 片段呈2 的指数增长，在 1～2 小时内可完成 25～30 次的循环，扩增的 DNA 片段数可增至 106～107倍。2.选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。二、统计菌落数目1.直接计数法这种方法是指利用特定的细菌计数板或者血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物的数量。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个面积为 1 mm2和高 0.1 mm 的计数室，该计数室又均分成 400 个小格。测量时将稀释的样品滴加在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下数出每个小格所含的细菌的平均数，再按下面的公式求出每毫升样品所含的细菌数。每毫升原液所含的细菌数＝每小格平均细菌数×400×1 000×稀释倍数要点提示 此方法的缺点是分不清活菌和死菌。2.间接计数法稀释涂布平板法，常用来统计样品中的活菌数，此法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个细菌繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落就代表一个细菌计数时先将待测样品进行一系列的稀释，再取一定量的稀释菌液接种在固体培养基上，使其较均匀地分布，经过一段时间的培养后，统计菌落数目，即可求出原液中的细菌数。疑点突破 这种方法计算出的为活菌数目，但是该数目往往比实际数目要小，原因是如果稀释的倍数不够大，很可能出现两个或者更多的细菌在一起共同形成一个菌落的情况，在最后计算时，我们却是按照一个细菌来计算的。联想发散 还可以用红细胞法来测量细菌的数目。该法要求先将数目已知的红细胞与已经稀释的菌液混合均匀，然后在显微镜下观察一滴菌液，计算出红细胞和细菌的数目比例然后...
