第一节 生物成分的分离与测定技术1．掌握分离与测定生物成分中蛋白质的技术。(难点)2．掌握采用醋酸纤维薄膜电泳的方法分离并纯化蛋白质。(重点)3．掌握采用水蒸气蒸馏法和脂溶性有机溶剂提取法提取脂肪成分。(重难点)分 离 与 测 定 生 物 成 分 中 的 蛋 白 质1．抽提液的选择2．分离蛋白质的方法(1)离心沉降法：通过控制离心速率，使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。(2)薄膜透析法：利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，使蛋白质与小分子化合物分离开的纯化蛋白质的方法。(3)凝胶色谱法：① 概念：根据蛋白质分子的大小对其进行有效分离的方法。② 凝胶③ 原理是否进入凝胶颗粒移动途径路程移动速度洗脱次序大分子蛋白质不能进入凝胶颗粒间隙较短较快先洗脱出来小分子蛋白质可以进入凝胶颗粒内部较长较慢后洗脱出来(4)电泳法：将所带电荷的数量和性质不同的蛋白质从混合样品中分离并纯化出来。3．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳配制试剂―→准备器材―→架滤纸桥―→浸泡薄膜―→细心点样―→平悬薄膜―→实施电泳―→染色―→漂洗―→脱色[合作探讨]探讨 1：在抽提液中加入蛋白酶抑制剂的目的是什么？提示：防止提取过程中蛋白质被蛋白酶分解。探讨 2：在电泳过程中，影响泳动速度的因素有哪些？提示：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的 pH 等因素。探讨 3：洗涤红细胞时能否用蒸馏水代替生理盐水？提示：不能。生理盐水能保持红细胞的渗透压稳定而不至于破裂，在未洗净血浆中的杂质蛋白前，红细胞如果提前破裂，就可能使血红蛋白质与杂质血浆蛋白混在一起加大了分离的难度。[思维升华]1．蛋白质的分离方法(1)薄膜透析法：① 原理：蛋白质水溶液具有亲水胶体溶液性质，不能透过半透膜。② 目的：去除小分子化合物杂质，如无机盐、单糖、二糖、氨基酸等。③ 常用的半透膜：肠衣、玻璃纸等。④ 步骤：将待纯化的蛋白质溶液装入透析袋内，再把透析袋放入透析液中即可。(2)离心沉降法：① 原理：在离心力的作用下，分子大小、密度不同的分子沉降速度不同，从而被分离。② 目的：使分子大小、密度不同的不同种类的蛋白质彼此分离。(3)电泳：① 概念：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。② 原理：不同的物质所带电荷不同，颗粒的大小、形状不同，因此，在电场中的泳动速度不同。③ 影响泳动速度的因素：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和...
