第一节 什么是克隆(略) 第二节 植物的克隆1．简述植物细胞全能性的含义。 2.简述植物组织培养的程序。(重点) 3.举例说明植物细胞全能性的体现。4．简述植物细胞、器官培养的方法和意义。(重点) 5.简述植物原生质体获得的方法及理解植物细胞工程的概念、操作过程和应用。(难点) 6.简述多途径的植物克隆实践。一、植物组织培养1．理论基础——植物细胞的全能性(1)含义：植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性，因而都具有发育成完整植株的潜能。(2)特点① 不同种类植物或同种植物的不同基因型个体的细胞全能性的表达程度大不相同。② 长期培养中，培养物的胚胎发生和器官形成能力下降。2．程序(1)半固体培养基的配制：培养基中含有适当营养物质、植物生长调节剂及 0.7%～1%的琼脂；把培养基倒入灭菌试管中凝固成半固体。(2)小组织块的切取：从消毒的根、茎、叶上切取。(3)愈伤组织的获得：植物组织块切口处的细胞在创伤的刺激下发生脱分化，成为分裂的细胞。在创伤表面形成一种由相对没有分化的活的薄壁细胞团组成的新生组织，即为愈伤组织。(4)新植株的再生① 诱导愈伤组织，使其产生出芽和根的顶端分生组织，并由此再生出新的植株。② 将愈伤组织分散成单个细胞，再在适宜培养基上培养发育成胚状体，进而发育成新的植株。3．成功的条件(1)深入探讨特定植物细胞全能性的表达条件。(2)在植物克隆试验研究中，尽量选择性状优良、细胞全能性表达充分的基因型。1．植物组织培养过程中，应如何操作才能成功？提示：离体条件；无菌操作。二、细胞培养和器官培养1．措施：通过平衡的植物激素配比进行调控。(1)适量的激动素和细胞分裂素配比可诱导芽的分化。(2)适量的吲哚乙酸及适当减除其他某些激素，可诱导生根。2．意义(1)利于植物的受精过程、胚胎发育过程及调节控制这些过程的环境因素、遗传基础和分子及生理生化机理的研究。(2)通过遗传工程的操作，研究与植物生长发育有关的重要基因或影响因素。(3)培育植物新品种。三、原生质体培养与植物细胞工程1．原生质体的获得方法在 0.5～0.6 mol/L 的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下用纤维素酶和果胶酶混合液处理根尖、叶片、愈伤组织或悬浮培养细胞，除去细胞壁。2．植物细胞工程(1)操作过程――→―→――→(DNA) (包括原生质体受体)(2)应用① 培育作物新品种。② 为遗传学、植物生理学和细胞生物学问题提供了良好的研究系统。2．利用紫草细胞经植物组织培养，一般到哪一阶段，便可大...
