第 2 课时 提取和鉴定 DNA一、实验原理1．析出原理(1)DNA 能溶解在 NaCl 溶液中，且溶解度随着 NaCl 浓度的变化而改变。(2)在 NaCl 的物质的量浓度为 0.14 mol/L 时，DNA 的溶解度最低。(如下图)2．DNA 提纯原理：DNA 不溶于乙醇溶液，而细胞中的某些物质能溶于乙醇溶液。3．鉴定原理：DNA 遇二苯胺在沸水浴加热的条件下呈蓝色。二、实验器材与试剂1．实验材料：鸡血细胞。(以鸡血为例)2．试剂与仪器：2 mol/L 的 NaCl 溶液、二苯胺试剂、蒸馏水、烧杯、试管、玻璃棒、纱布、体积分数为 95%冷却的乙醇溶液、酒精灯、三脚架、石棉网等。三、实验方法与步骤1．制备鸡血细胞液(1)先配备 10%的柠檬酸钠溶液，按 180 mL 新鲜鸡血混合 100 mL 10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。(2)将充分混合的鸡血细胞液置于 4 ℃冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后获得鸡血细胞液。2．粗提取鸡血的 DNA(1)获取核物质：取 5～10 mL 鸡血细胞液注入 50 mL 烧杯中，加蒸馏水 20 mL，用玻璃棒搅拌 5 min，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。(2)溶解 DNA：取浓度为 2_mol/L 的 NaCl 溶液 40 mL 加入滤液中，用玻璃棒沿同一方向轻轻搅拌，使其混合均匀。(3)析出 DNA 丝状物：沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌。由于 NaCl 溶液浓度的下降，使得 DNA 溶解度下降，蛋白质溶解度上升，DNA 析出成白色丝状物，当丝状物不再增加时，停止加入蒸馏水。(4)滤取 DNA 丝状物：用多层纱布过滤，取纱布上 DNA 的丝状物。(5)DNA 丝状物再溶解：取含 DNA 的丝状物放入桡杯内，加入 2_mol/L 的 NaCl 溶液 40 mL，用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌 3 min，使丝状物尽可能多地溶解。(6)过滤含 DNA 的 NaCl 溶液：用两层纱布过滤含 DNA 的 NaCl 溶液，取其滤液。3．提纯 DNA在滤液中加入冷却的体积分数为 95% 的乙醇 溶液，并用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌，由于 DNA 不溶于乙醇，DNA 的絮状物会从溶液中析出。用玻璃棒将絮状物挑起，用于 DNA的鉴定。4．DNA 的鉴定[填图]四、注意事项1．制备鸡血细胞液时，要在取新鲜鸡血的同时加入抗凝剂，使血液分层，取下层血细胞沉淀。2．获取较多 DNA 的关键是向鸡血细胞液加入足量的蒸馏水，以便使细胞膜和核膜破裂，释放出核内物质。3．实验中有...
