第一章 基因工程知识系统构建必背要语1．限制性核酸内切酶可识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列，并在特定位点上切割 DNA分子。2．质粒作为基因工程的载体需具备的条件有：能在宿主细胞内稳定保存并自我复制；具有一个至多个限制酶切割位点；具有标记基因。3．基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因等。4．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。将目的基因导入动物细胞常用显微注射法，导入微生物细胞常用感受态细胞法(Ca2＋处理法)。5．检测目的基因是否导入受体细胞常用 DNA 分子杂交法；检测是否转录，常用分子杂交法；检测是否翻译，常用抗原—抗体杂交技术。6．蛋白质工程并不是直接改造蛋白质分子的结构，而是通过基因操作来实现对天然蛋白质的改造。7．蛋白质工程的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列→利用基因工程技术合成新的蛋白质。规律方法整合整合一 几种重要酶的比较 种类项目 限制酶DNA 连接酶DNA 聚合酶解旋酶作用底物DNA 分子DNA 分子片段脱氧核苷酸DNA 分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱基对间的氢键作用特点切割目的基因及载体，能专一性识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开将双链 DNA 片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上将 DNA 两条链之间的氢键打开作用结果形成黏性末端或平口末端形成重组 DNA 分子形成新的 DNA分子形成单链 DNA 分子特别提醒 在基因工程中逆转录酶也常被使用。逆转录酶又称 RNA 指导的 DNA 聚合酶，是以RNA 为模板合成 DNA 所需的酶。逆转录酶催化的反应叫逆转录。在这个过程中，遗传信息流动的方向是从 RNA 到 DNA，正好与转录过程相反，故称逆转录。例 1 下图为 DNA 分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA 聚合酶、DNA 连接酶、解旋酶、RNA 聚合酶作用的正确顺序是( )A．①②③⑤④ B．①②④③⑤C．①④②③⑤ D．①④③⑤②答案 C解析 图中①是限制性核酸内切酶切割 DNA 分子；②是 DNA 连接酶将两个 DNA 分子的缝隙缝合起来；③是在解旋酶的作用下 DNA ...
