第 1 课时 微生物的分离和培养[学习导航] 1
简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项
掌握制备细菌培养基的方法
学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌
[重难点击] 1
培养基的配制方法及常见种类
大肠杆菌的接种与分离培养
一、微生物分离和培养的基本理论1
无菌操作技术实验室常利用高温处理达到灭菌效果,包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法
(1)干热灭菌方法是将拟灭菌的物品放在干热灭菌箱内,在 160~170 ℃温度下加热 1~2 h以达到灭菌的目的
(2)湿热灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌锅进行,如手提式高压蒸汽灭菌锅就是实验室常用的灭菌仪器之一
高压蒸汽灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤
配制培养基(1)培养基概念:为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质
(2)培养基类型① 天然培养基:采用动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成,如牛肉膏蛋白胨培养基
优点:取材便利、营养丰富、配制简便;缺点:营养成分难以控制、实验结果的重复性较差
② 合成培养基:由准确称量的分析纯等级别的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成,如葡萄糖铵盐培养基
优点:化学成分及其含量明确、实验的可重复性好;缺点:配制繁琐、成本较高
(3)培养基成分:一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质
(4)培养基的配制原则:在配制培养基时,根据拟培养的微生物的不同需要,有时还要加入维生素等特殊的营养物质,并要调节培养基的 pH 使之满足微生物生长的需要
接种微生物(1)接种的概念:在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程
(2)常用的接种工具:玻璃涂布器、接种针、接种环等
(3)接种方法① 用接种针进行穿刺接种
② 用接种环进行斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种
③ 用玻璃涂布器