血红蛋白的提取和分离一、基础知识分析与教学建议(一)凝胶色谱法知识要点:1
凝胶色谱法的用途;2
凝胶色谱法分离蛋白质的原理
教学建议:教师在介绍凝胶色谱法的基本原理时,可以结合教科书提供的插图,让学生对凝胶色谱法分离蛋白质的过程有一个直观的认识
(二)缓冲溶液知识要点:1
缓冲溶液的组成和作用机理;2
熟悉一般缓冲溶液的配制方法;3.缓冲溶液广泛应用于生化实验、微生物的培养、组织切片和细菌染色以及酶的研究等方面
教学建议:教师首先可以结合生活中的一些缓冲现象,让学生充分理解缓冲溶液的重要性
在进行本课题的实验操作之前,可以让学生查阅相关资料,练习一些常用缓冲液的配制
(三)电泳知识要点:1
电泳的基本原理;2
不同类型的电泳
教学建议:电泳技术广泛应用于生化实验,在分离分析酶、蛋白质、核酸等生物大分子方面具有较高的分辨率
教师可以通过一个简单的实验使学生理解电泳现象,比如在盛有红褐色 Fe(OH)3 胶体的 U 形管的两个管口,各插入一个电极
通直流电后,发现阴极附近的颜色逐渐变深,阳极附近的颜色逐渐变浅
这表明 Fe(OH)3 胶体粒子带正电荷,在电场作用下向阴极移动
这种在外加电场作用下,带电粒子发生迁移的现象就叫做电泳
教科书中用楷体字简单地介绍了聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理,教师可以结合资料,开拓学生的知识面,围绕聚丙烯酰胺凝胶电泳,介绍其他类型的电泳原理及应用
本实验的选做部分是通过 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳对血红蛋白进行纯度的鉴定,同时也可以测定血红蛋白亚基的分子量
此外,还可以通过聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳来测定天然蛋白的分子量;通过聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳来测定蛋白的等电点;等等
相关原理可以查阅生物化学技术的有关书籍
使用 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量时,可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳,根据已知分子量的标准蛋白的电泳区带位置,用