平板分离技术与活菌计数实验报告篇一：微生物学大实验实验报告微生物学大实验实验题目：土壤微生物的分离纯化与鉴定一．实验目的：1.巩固本学期所学的所有微生物实验操作技术。2.再次强调无菌操作概念。3.初步学习微生物鉴定纯化的方式和思路。4.学会应用相关手册对微生物进行分类。二．实验原理：1.培育基的制备、消毒与灭菌：培育基是人工配制的适合微生物生长繁衍或积累代谢产物的营养基质，用以培育、分离、鉴定、保留各类微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实验和研究的目的不同，所以培育基的种类很多。可是，不同种类的培育基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母的培育基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培育基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培育基时，都要按照不同微生物的要求将培育基的pH调到适合的范围。另外，由于配制培育的各类营养物质和容器等含有各类微生物，因此，已配制好的培育基必需当即灭菌，若是来不及灭菌，应暂存冰箱内，以避免其中的微生物生长繁衍而消耗养分和改变培育的酸碱度所带来不利的影响。2.微生物的分离与纯化：自然界中各类微生物混杂生活在一路，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培育状态。从混杂的微生物群体中取得只含有某一株微生物的进程称为微生物的分离与纯化。土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论是数量仍是种类都是及其丰硕的。因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离到很多有价值的菌株。本实验将采用平板划线分离法。3.平板分离技术与活菌计数：值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并非必然保证是纯培育。因此，纯培育的肯定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。有些微生物的纯培育要通过一系列的分离与纯化进程和多种特征鉴定方能取得。从混杂的微生物群体中取得只含有某一种或某一株微生物的进程称为微生物的分离与纯化。平板分离法主要有：（1）平板划线分离法，（2）稀释涂布平板法。后者除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；通过培育后在平板上形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，按照稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每一个菌落不必然是单个细胞生长繁衍而成，有的可能来自2个或多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是此刻利用菌落形成单位（colony-formingunit，CFU）取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。4.分离菌株的鉴定：微生物的分类鉴定是微生物的重要内容，一般从菌落特征、细菌特点及生理生化、分子生物学等方面进行鉴定。各类细菌在代谢类型上表现了很大的不同。不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和最终产物也不一样。不同细菌对营养的要求不同也说明了它们有不同的合成能力。所有这些都反映了它们是有不同的酶系统。细菌的这种生化反映的多样性在自然界产生了两种结果：第一、使自然界所有的有机分子都有可能取得分解；第二、使不同细菌之间有了彼此作用和彼此依赖的基础。另一方面，微生物生化反映是微生物分类鉴定中的重要依据之一，细菌的生化反映的多样性也被人们作为细菌的鉴定和分类方式来利用，可以辨别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。5.生理生化反映：微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪等不能直接利用，必需依托产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些进程都可通过观察细菌菌落周围的物质转变来证明。糖发酵实验是常常利用的辨别微生物的生化反映，在肠道细菌的鉴定上尤其重要，绝大多数细菌都能利...
