凝血酶的提取凝血酶是机体凝血系统中的天然成分，它由两条肽链组成，多肽链之间由二硫键连接。凝血酶在体内以凝血酶原形式存在，在一定条件下凝血酶被激活并转化为有活性的一种蛋白质水解酶。分子量335800，白色无定形粉末，溶于水，不溶于有机溶剂。目前国内主要从动物血浆及人血浆中制备凝血酶，在经激活物激活而成为凝血酶。它可催化血纤维蛋白原中血纤维肽A和B的断裂，转变成不溶性血纤维蛋白凝块。凝血酶在临床上应用广泛，常以干粉或溶液局部涂于伤口及手术处，控制毛细血管血液渗出，多用于骨出血、扁桃腺摘除和拔牙时出血等。有时也可口服，用于胃和十二指肠出血。凝血酶局部止血效果好，且无副作用。目前凝血酶的应用范围正日渐扩大，由单纯的局部外敷发展到外科手术、耳鼻喉、口腔、妇产、泌尿及消化道等部位出血的止血，亦可作为多种外用止血药物的重要原料，其止血效果优于“对氨基苯甲酸”、“止血环酸”、“止血敏”等通过注射后须经血管收缩而起止血作用的药物，顾深受广大用户的欢迎，将广泛应用于临床。由于临床使用该药日渐广泛，将使目前十分紧俏的凝血酶更趋紧缺，因此生产前景看好，只要原料有保证，技术过关，就可获得产品。（一）原料及试剂：1、动物血液：须选用新鲜的动物血液，防止混入其它杂志。盛血液的器具一定要干净。2、柠檬酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）：又名枸橼酸钠。无色晶体或粒状粉末。相对密度1.875。150℃时失去结晶水，温度再高则分解。溶于水，难溶于乙醇。本工艺中主要作抗凝血剂用，防止血液凝固。选用化学纯试剂。3、醋酸：学名乙酸。无色澄清液体，有刺激气味。相对密度1.049，沸点118℃。溶于水、乙醇和乙醚。用于调节pH值。选用化学纯试剂。4、氯化钠：白色立方晶体或细小结晶粉末。相对密度2.165，熔点801℃。味咸，中性。有杂质时易潮解。溶于水和甘油，难溶于乙醇。选用一级工业品。5、氯化钙：白色立方晶体，易潮解，相对密度2.15，熔点782℃，沸点大于1600℃，溶于水、乙醇。本工艺中用作激活剂，选用分析纯试剂。6、丙酮：无色易挥发、易燃液体。有微香气味。相对密度0.7893，沸点56.5℃。于水、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等混溶。能溶解油、脂肪、树脂和橡胶。其蒸汽与空气形成爆炸性混合物，化学性质活泼。本工艺中用作沉淀剂，选用化学纯试剂。7、乙醇：又称酒精，无色透明易挥发、易燃的液体。有酒味和刺激辛辣滋味。相对密度0.789。沸点78.4℃。溶于水、甲醇、乙醚、氯仿等。有吸湿性，能与水形成共沸混合物。其蒸汽与空气形成爆炸性混合物。本工艺中用来洗涤凝血酶，选用工业乙醇。8、乙醚：又称二乙醚。是易流动的无色透明液体。有令人爽快的特殊气味，其蒸汽能使人失去知觉，甚至死亡。相对密度0.7135，沸点34.5℃。难溶于水，易溶于乙醇和氯仿等溶剂，极易挥发和着火。本工艺主要用于洗涤凝血酶，选用化学纯试剂。使用时，操作人员应注意防护，避免吸入，周围应杜绝明火并保持空气流通。9、草酸钾：又名乙二酸钾。这里用于测定凝血酶活性，选用分析纯试剂。10、标准纤维蛋白原：这里用于测定凝血酶效价，选购药检部门提供的标准品。（二）凝血酶的提取工艺：1、工艺流程：血球（用于制备血红素）动物血液（分离血浆）血浆上清液（弃去）纤维蛋白（弃去）凝血酶原（凝血酶原的激活）溶液丙酮液（回收丙酮）（沉淀分离凝血酶）凝血酶粗品（除杂）滤液沉淀（弃去）（分离提取凝血酶原）（沉淀）沉淀（干燥）精制凝血酶2、操作步骤：（1）分离血浆，提取凝血酶原：取动物血液，按每千克动物血液加3.8克柠檬酸三钠投料，搅拌均匀，装入离心管中，以3000转/分的速度离心15分钟，分出血球（可供制备血红素），收集血浆。把血浆溶于10倍蒸馏水中，用1%浓度的醋酸调节pH值至5.3，在离心机上离心15分钟，弃去上清液，收集的沉淀物即为凝血酶原。（2）凝血酶原的激活：在30℃的条件下，将凝血酶原溶于1~2倍的0.9%氯化钠溶液中，搅拌均匀，加入占凝血酶原重量1.5%的氯化钙，搅拌15分钟，在4℃下放置1.5小时左右，保证凝血酶原转化为凝血酶。（3）沉淀分离凝血酶：将激活的凝血酶溶液用离心机离心15分钟，弃去沉淀。上清液移入搪瓷桶...
