十三血清甘油三酯的测定血清甘油三酯测定方法较多但主要VIP免费

实验十三血清甘油三酯的测定血清甘油三酯测定方法较多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，还原及显色等步骤。近年发展的酶学方法测定操作步骤虽然简单，但要许多纯酶制剂，此外还有光散射测定法，亦需要特点器材，故不易推广使用，现介绍两种常用的方法：一、酶法测定甘油三脂【目的】1.熟悉酶法测血清TG的基本原理及注意事项。2.熟练进行实验操作。3.了解TG测定主要临床意义。【原理】酶法测定是用脂肪酶或脂蛋白脂酶(LPL)使血清中甘油三酯水解，生成甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶(GK)催化下，生成3-磷酸甘油，3-磷酸甘油在甘油磷酸氧化酶(GPOD)的催化下，生成磷酸二羟丙酮和H2O2。然后，以Trinder反应测定H2O2，计算血清甘油三酯含量。甘油三酯LPL甘油+3脂肪酸甘油+ATPGK3-磷酸甘油+ADP3-磷酸甘油GPOD磷酸二羟丙酮+H2O2H2O2+酚+4-氨基安替比林红色醌亚胺+H2O【器材】试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。【试剂】甘油三酯试剂盒（3v）【操作】加入物(ml)血清标准液(1.13mmol/L)测定管0.01—标准管—0.01空白管——酶试剂1.01.01.0混匀，置37℃水浴15min,以空白管校“0”，500nm波长比色，取测定管光密度值。【计算】血清甘油三酯(mmol/L)=AR/AS×1.13【正常参考范围】正常参考范围：0.56~1.70mmol/L【注意事项】1.配制后的酶试剂可在4℃存放4天,几种酶中以甘油激酶较易失活。2.标本应新鲜,血清放置时间长可使游离甘油浓度升高。二、乙酰丙酮显色法【目的】1．了解乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯的原理；2．熟练进行实验操作。3.了解TG测定主要临床意义。【原理】血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的黄色物质。与同样处理的标准液比色计算，即得血清中甘油三酯的含量，反应式如下：【器材】试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。【试剂】1、抽提剂：正庚烷/异丙醇＝2/3.5（v/v）2、0.04MH2SO43、异丙醇（A.R）4、皂化试剂：取6.0gKOH溶于60ml蒸馏水中，然后取异丙醇40ml混合，置棕色瓶中室温保存。5、氧化试剂：称取65mg过碘酸钠溶于约50ml蒸馏水，然后加入7.7g无水醋酸铵溶解，再加6ml冰醋酸，并加水至100ml。贮棕色瓶内室温保存。6、乙酰丙酮试剂：0.4ml乙酰丙酮加到100ml异丙醇中，混匀，置棕色瓶内室温保存。7、三油酸甘油酯标准液：贮存液(0.1mmol/l）：精确称取三油酸甘油酯1.000g，溶解于抽提剂中，定容至100ml，置冰箱存。应用液（0.01mmol/l）：贮存液用抽提剂10倍稀释，置冰箱保存。【操作】带塞试管3支，编号，按下表操作：血清（ml）应用标准液（ml）蒸馏水（ml）抽提剂（ml）0.04MH2SO4(ml)测定管0.2——2.50.5标准管—0.20.22.30.5空白管——0.22.50.5边加边摇，加好后，剧烈振摇15分钟，静置分成二相后，准确吸取各管上层清液0.3ml，分别加至另外三支试管中。按下表操作：异丙醇（ml）皂化试剂（ml）1.00.3充分混匀，置65℃水浴中3分钟氧化试剂（ml）1.01.01.01.00.31.00.3乙酰丙酮试剂（ml）1.01.01.0混匀，置65℃水浴中15分钟，取出后冷却，于420nm处，以空白管调零点，读取各管光密度。【计算】甘油三酯=×0.2××0.01129=×100×0.01129注：mg/ml×0.01129=mmol/L【正常参考范围】0.113-1.69mmol/l【注意事项】1、应空腹采血，否则结果偏高。2、显色后光密度随时间延长而略增高，故应立即比色。标本多时，可置冷水浴中逐管比色，这样对结果影响不大。【临床意义】血清三脂酰甘油有随年龄增长而上升的趋势，体重超过标准者往往偏高。正常成人空腹给脂肪餐(脂肪1g／kg体重)后，一般2～4小时内血清混浊程度及三脂酰甘油含量达高峰，8小时后恢复正常。脂肪清除作用较差的人，清除时间延长。血中的三脂酰甘油以乳糜微粒和前β-脂蛋白中含量最高，它与动脉粥样硬化的形成有很大关系，与冠心病的发生密切相关。1．病理性增高见于原发性高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退、糖原积累病、脂肪肝、其它肝病、妊娠等。2．病理性降低...