LC/MS原理及基础知识介绍沃特斯中国有限公司应用部WatersChinaLtd.MS的历史1910年世界上第一台现代意义质谱仪在英国剑桥Cavendish实验室出现1917年电喷雾(Electrospray物理现象被发现(并非为了MS1918年世界上第一台实际意义质谱仪在美国芝加哥大学实验室出现(扇型磁场MS1943年世界上第一台商业质谱仪1953年四极杆质量分析器质谱仪1955年飞行时间质量分析器质谱仪1960’s开发GC/MS60’s-70’s大气压电离(APcI源被发现(但并未被广泛应用70’s-80’s开始广泛研究LC/MS1979年传送带式LC/MS接口成为商业产品1982年离子束LC/MS接口出现1984年第一台电喷雾MS仪宣告诞生1988年电喷雾离子源MS首次应用于蛋白质的分析…...WatersChinaLtd.LC/MS中的液相色谱HighPerformanceLiquidChromatography-高效液相色谱液质联用的前提和基础=进样+分离根据化合物的化学特性分离样品(比如极性化合物,非极性化合物,酸性化合物,碱性化合物等等•分离技术•分离效率高•流动相参与分离•连续流出,峰宽有限•有时需要使用缓冲盐提高分离度•高压环境工作(>1000psiWatersChinaLtd.LC/MS中的质谱MassSpectrometry-质谱质量是物质固有特征之一,不同的物质有不同的质量谱分析物被转化为气相离子而被分析这些离子按其质荷比(m/z被分离而被检测质谱图即是相关的离子流对m/z的图•灵敏度高•定性/定量本领高•脉冲扫描采集数据•高真空环境工作溶剂参与反应WatersChinaLtd.LC/MS数据形式Gamabufotalin保留时间WatersChinaLtd.质谱的种类及相关联用技术液质联用系统的常见部件离子化质子过滤器离子检测器色谱分离样品引入数据采集及控制WatersChinaLtd.从LC到MS的转变物态转变:液态-气态带电状态:“中性”-离子真空变化:760torr-10-5to10-8torrWatersChinaLtd.LC/MS系统构成EI电离源样品引入API电离源样品引入WatersChinaLtd.传统的样品电离方式:EI源EI源:电子轰击电离源可得经典的质谱谱图可查询质谱库,质谱结果可用工业标准谱库检索,是绝对的化合物鉴定相对易得,耐受性好谱图可解析,阐明结构信息但是,电离效率较差,测定的分子量范围、流速范围有限;可测化合物类型有限样品灯丝集电极离子聚焦透镜子去析器-的WatersChinaLtd.EI源LC/MS系统:WatersIntegrity系统EI的宝贵遗产HOOGamabufotalin(IIIM-18+M+M-36+3414023843669110712314517519179201135M-162+241911071231451751917920134138436M-18+M+M-36+M-162+24102HighResMassSpec,Brown,Kamano,Pettit,Org.MassSpec.,1972WatersIntegrityLC/MSSystem,Pfizer,1996WatersChinaLtd.大气压电离技术电喷雾电离(ElectrosprayIonization-大气压化学电离(AtmosphericPressureChemicalIonization-相转化过程WatersChinaLtd.什么是电喷雾电离(ESI?3离子从液滴表面蒸发出来1含各种离子的液滴-++++-----+++--++++-----+++-2随着液滴的挥发,电荷密度增大,离子集中到液滴表面++-+-+++-++-+-+++-WatersChinaLtd.什么是APCI?xxxHH+M1电离产生起决定作用的溶剂离子2样品分子与反应离子发生反应,形成离子簇MH+xxxxXH+xxH+MH+3离子去簇后被传输到质谱的质量分析器X=溶剂分子,比如H2O,NH3等等一般适合分析挥发性化合物,也常分析从中性到极性的化合物纯气相离子化过程,只产生极少的添加离子谱图简单流速范围大,从0.2到2.0mL/min,而不用分流WatersChinaLtd.API电离源(ESI+电离模式:软电离产生[M+H]+准分子离子峰WatersChinaLtd.AllianceZQLC/MS系统WatersChinaLtd.WatersZQ...WatersChinaLtd.同一样品的质谱图可能并不一样!SampleDescription80150m/z10SALICYLAMIDE1(0.067Cn(Cen,2,80.00,ArScanES+1.19e8138.01370121.2100.290.18818293.9.8114.0110.22.013303.98.9143.0149.32-HydroxybenzamideMW:137Form:C7H7NO2CASRegNo:65-45-225225250162839658092120137CONH2OHFigure1.WileyLibraryReferenceSpectrumofSalicylamideWatersChinaLtd.CID产生的过程AnalysisofSulfamethazinebyElectrospray1000,000,000,000Sulfamethazine[M+H]+2772782792802812822,0004,0006,0008,00010,000000ParentIonRegionMW278m/zPositiveionmode,ESI,2ul/min,50%MeOH:49%H2O:1%HOAc,00012,0,000,0001502002503...
