动物细胞融合和单克隆抗体(公开课)VIP免费

1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合◆细胞杂交：不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。◆杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合受精作用二.动物细胞融合二.动物细胞融合2、诱导融合的因素•生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。)•化学法：聚乙二醇PEG诱导融合.•物理法：电激融合病毒颗粒黏附细胞表面细胞膜连接细胞膜被病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞3、动物细胞融合技术的应用•细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。•利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理融合前处理融合前处理诱导方法诱导方法用用途途细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用纤维素酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散物理、化学方法物理、化学方法物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法获得部分获得部分或完整植株或完整植株主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体•人们获得抗体的传统方法是?–将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体•这种方法的缺点是什么?–效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。•运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？•能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？B淋巴细胞在体外不能无限增殖。二：动物细胞融合的成功应用——单克隆抗体的制备二：动物细胞融合的成功应用——单克隆抗体的制备思考单克隆抗体的制备—极富创造性的方案将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。•米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。杂交杂交细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞BB淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫的小鼠的小鼠提取杂交瘤杂交瘤细胞细胞第一次筛选第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选第二次筛选能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体1.动物特异性免疫2.分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）3.细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）4.第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）5.第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。7.提取单克隆抗体。1、单抗的制备过程要点：33）、为何要进行两次筛选？）、为何要进行两次筛选？4）、如何进行第2次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。问题强化：1）、本过程...