用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量VIP免费

用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量摘要用酶联免疫法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，结果表明：在低添加水平为0.0125mg/kg、0.0250mg/kg、0.0500mg/kg、0.1000mg/kg、1.0000mg/kg时，均能将莱克多巴胺检出，该法具有灵敏度高、简单、快捷的优点。关键词猪肉；莱克多巴胺；酶联免疫法近年来全社会对“瘦肉精”猪非常关注，政府出台了一系列相关法律法规，加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加“瘦肉精”等违禁药物的打击力度，同时对饲料、尿样、内脏中“瘦肉精”残留量的检测水平和检测频率也有了很大的提高，现有证据表明，莱克多巴胺作为“瘦肉精”替代品已在养猪生产中被使用。对于莱克多巴胺含量的测定，常用的检测方法有分光光度法、液相色谱法和气相色谱法等。本试验用酶联免疫方法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，以摸索有效、快速的莱克多巴胺检测方法。1材料与方法1.1材料与试剂样品来源：采自某区域销售的5份猪肉样品。莱克多巴胺标准品，纯度99.5%，购自中国药品生物制品检定所；超纯水由Milli-Qliocel纯水器制备；莱克多巴胺标准溶液，质量浓度为10ug/mL，用莱克多巴胺标准品自行配制。1.2仪器96孔的酶标板；BP310S电子分析天平，感量为0.001g，Sartorius公司；RJ-TDL-40B离心机，转速为4000rmp，锡市瑞江分析仪器有限公司；WellscanMW．3型酶联检测仪，芬兰Labsystems；MS2型漩涡混合器，IKA公司；100μL可调微量移液器，美国RAININ。1.3试验方法1.3.1样品前处理。加4倍样品抽提缓冲液到适量的样品中，用均质器混匀。称取1.4g均质样品，4000rmp在室温（20～25℃）下离心5min，转移0.5mL上清液到管子里，75℃孵育5min，最大速度涡旋1min。4000rmp室温离心5min，转移0.2mL上清液到1个新管子里，加5μL样品平衡缓冲液，混合，稀释因子为4。1.3.2测定。采用间接ELISA法，操作步骤如下：用碳酸盐缓冲液将包被抗原按合适浓度稀释后包被酶标板（100μL/孔），于37℃温箱中反应1~2h，然后移至4℃冰箱过夜；洗涤液洗酶标板3次，每次3～4min；用1％OVA封闭，300μL/孔，置37℃反应lh；洗涤后加入倍比稀释的待测抗体（100μL/孔），置37℃反应2h；洗涤后加羊抗兔IgG-HRP（1∶1000），置37℃反应1h；洗涤后每孔加入底物溶液100μL，置37℃反应15～20min后，每孔加入50μL终止液以终止反应。待测抗体每个稀释度作3个平行试验。1.3.3加标样品测定。吸取10μL/mL莱克多巴胺标准溶液50μL、250μL和500μL，分别添加到5g（精确至0．001g）的空白样品中，使添加水平为0.0125mg/kg、0.0250mg/kg、0.0500mg/kg、0.1000mg/kg、0.5000mg/kg和1.0000mg/kg，每添加水平设5个重复，同时设样品空白对照。2结果与分析从表1可看出，在低添加水平为0.0125mg/kg、0.0250mg/kg、0.0500mg/kg、0.1000mg/kg、0.5000mg/kg和1.0000mg/kg时，检测结果分别为阴性、阴性、阳性、阳性、阳性、阳性。可以看出用酶联免疫方法均能将莱克多巴胺检出。3结论与讨论（1）应用酶联免疫法测定猪肉中的莱克多巴胺，方法可行、灵敏度较高，是一种简单和快捷的筛选方法。（2）猪肉样品前处理，在转移上清液时，要避免吸入脂肪层，脂肪容易影响抗原与抗体反应，容易得出假阴性的结果。猪肉样品要充分研磨，以充分将莱克多巴胺抽提出来。（3）酶联免疫法测定猪肉中莱克多巴胺，方法简捷可靠，是一种值得推广的定性筛选方法，可作为液相色谱等仪器法的补充。4参考文献[1]高燕红，吴西梅．液质联用快速测定饲料中的莱克多巴胺和克伦特罗[J]．中国卫生检验杂志，2005，15（6）：643-645.[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2005年版）[M]．北京：化学工业出版社，2005.[3]张晓辉，李余动，孔蕾，等．ELISA和GICA快速检测水产品中氯霉素残留的比较[J]．浙江农业学报，2005，17（4）：216-218．[4]陈红青．高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗与沙丁胺醇含量的测定[J]．福建大学学报（自然科学版），2003，31（5）：615-617．[5]于洪侠，杨曙明．莱克多巴胺残留检测方法研究进展[J]．中国兽药杂志，2004，38（11）：44-47.[6]应永飞，皮雄娥，吴平台，等．气相色谱一质谱法同时测定动物尿...