NF-KB的激活与检测方法VIP免费

NF-KB11页)(doc的激活与检测方法【6】，但几乎所有已知NF-κB诱导物均能通过IκBα的降解迅速而短暂地活化NF-kB，同时IκBα不仅阻止已转移激活二聚体的DNA结合，而且裂解他们同源DNA位点前体复合物。IκBβ和IκBε则起到缓冲系统活化波动趋势的作用，从而保持NF-κB有一个相对较长时间的响应。【5】I-κB激酶IKK是I-κB离开NF-κB并使之得以活化的必需前提，随之降解抑制因子I-κB。IKK是由一个调节亚单位，IKK-γ(也被称为NEMO)和两个催化亚单位IKK-α，IKKβ组成。IKKα和IKKβ属于丝/苏氨酸蛋白激酶，而NEMO虽包含有多个蛋白反应基序但却无明显的催化区。在经典的NF-KB激活途径中，IKKβ的活化起到了非常重要的作用。IKKβ基因敲除实验证实小鼠在缺乏IKKβ情况下，不仅影响NF-κB激活通路，而且由于不能控制大量肝细胞凋亡而在胚胎期出现死亡，这些小鼠在炎症细胞因子作用时，NF-κB激活通路出现障碍，由此说明，IKKβ是促炎症反应因子刺激诱导NF-κB活化的主要激酶，IKKβ在NF-κB激活通路中可能比IKKα更重要【7】。IKKα不只是传统的认为只是I-κB激酶，而且以其他的方式影响着基因的表达。DEVIN和YAMAM0TO等【8-9】研究认为IKKα可作用于IKKβ及其上游区而直接或问接增加IKKβ对IKBα的磷酸化作用，从而影响NF-KB基因的激活表达。Sankarghosh和matthews.hayden发现IKKα限制了促炎症巨噬细胞的反应【10】。2．NF-κB的激活细胞处于静息状态时，NF-κB-IκBs复合物(NF-κB-IκBα、NF-κB-IκBε)在胞浆与胞核之间穿梭，处于动态平衡。各种信号通过降解IκBs的方式来活化NF-κB，活化的NF-κB然后进入细胞核内与DNA结合。IκBs首先是在IκBs激酶（IKK）催化下使其的32和36位丝氨酸残基磷酸化。接着IκBs在SCF-E3泛素化酶复合体的催化作用下多泛素化而被蛋白酶降解。活化的NF-κB转位到核内与其相关的DNA基序结合以诱导靶基因的转录。这种方式的NF-κB活化途径被称为经典的NF-κB活化途径。NF-κB通过该途径调节的目的基因有炎症介质、细胞因子(如TNF-α、IL-1等)、黏附分子、急性期蛋白及可诱导的效应期酶等。其他的不被人所熟知的途径也能从IκBs中活化部分的NF-κB。这些途径包括酪氨酸磷酸化诱导的IκBs解离途径途径和蛋白激酶-2诱导的IκBs的流动加快的方式。释放后的NF-kB可以通过例如修饰自身的亚单位的方式来影响自身的转录激活效能。活化的NF-κB快速的诱导编码IκBα的基因的转录，因此产生高水平的自身抑制剂。新合成的自由的IκBα进入细胞核内，然后使DNA上NF-κB解离并且将NF-κB排出细胞核，因而恢复到静息状态。3.生物学功能3.1NF-κB与细胞凋亡3.1.1抗凋亡的作用最初，Beg等【11】在1995年发现缺乏RelA亚单位的鼠在胚胎期的死亡主要是因为肝细胞大量凋亡引起的提示含有RelA的NF-κB二聚体在胚肝中可以保护细胞不受促凋亡基因的影响：实验表明，缺乏NF-κB／Rel基因或含有NF-κB／Rel抑制剂的培养细胞在受到TNF或T细胞激活剂刺激时易发生凋亡【12】。在B淋巴细胞系中也可发现NF-κB的抗凋亡作用。这些细胞系表达一定活性NF-κB，若被灭活则可诱导凋亡。当成熟B淋巴细胞被NF-κB活性抑制剂或抗氧化剂处理时，就发生了细胞凋亡。因此B细胞中一定水平的NF-κB对于保证细胞存活及增殖有重要的作用【13】。目前，NF-κB主要通过以下三条途径来抑制凋亡【14】。(1)NF-κB通过上调编码抗凋亡的细胞因子的基因表达来抑制凋亡。ML等【15】发现在白细胞介素一6(IL一6)的启动子上有NF-κB的结合位点，TNF-α，辐射等通过激活NF-κB而上调IL-6的基因表达。同样的，研究者们也发现在IL-1，IL-2，巨噬细胞集落刺激因子(M—CSF)等细胞因子上游启动子序列中均含有NF-κB的结合位点【16】。(2)NF-κB通过诱导或上调抗凋亡基因抑制凋亡。公认的抗凋亡蛋白Bcl—xl是Bcl一2家族中bel—X基因的表达产物。Herramnn等【17】发现在该基因的启动子中也含有2个与NF-κB优先结合的序列。Wang等发现NF-κB能够通过激活bcl-2家族中的A1／Bfl一1而抑制了由TNF—α引起的凋亡。(3)NF-κB通过诱导TRAF(TNF受体相关因子)和IAP(凋亡抑制蛋白)抑制凋亡【18】。TRAF与其相应的配体TNF结合后，在...