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重组生物酶制剂成果转化项目结题验收报告一、项目研究开发的内容、技术路线、考核目标及主要技术经济指标1、项目研究开发的内容重组生物酶制剂（D-氨基酸氧化酶）2、技术路线（a）菌种活化。将在低温保藏的菌种接种于活化斜面，在一定的温度下，培养一段时间，活化菌种。（b）摇瓶培养。将活化好的菌种接种于摇瓶内，在一定条件下培养16h—20h,OD达到一定水平。（c）种子培养。将摇瓶种子接种入一级种子罐，培养到一定OD值，后接入二级种子罐继续培养，达到一定水平后，接入发酵罐，进行发酵培养，积累目的产物。（d）在一定温度，ph，通气条件下，进行发酵培养，当目的产物积累到一定程度，可以结束发酵，再经过一定的预处理。（e）菌液分离。利用离心机，板框过滤，膜分离等技术将菌体和发酵清液分开。（f）目的产物在菌体细胞内部。提取目的产物的流程，首先将细胞破碎，经过离心处理去掉破碎的细胞碎片，留上清液，经过提取纯化等工艺，再通过固定化等方法提取目的产物。3、考核目标及主要技术经济指标A、主要考核指标1项目产品各项技术指标还未有国家的统一标准，只是在行业内对产品的各项性能指标进行规定，是满足客户使用需求的最低标准。该项目生产的产品各项指标均满足行业内规定，具体如下：（1）发酵水平不低于10000单位/升（2）总收率65+5%（3）发酵时间：35--45小时（4）生产菌：大肠杆菌基因工程菌（5）产品外观呈现白色、黄色或棕色球状颗粒（6）产品粒径(≥100μm)的达到95%以上（7）产品含水率小于65%（8）产品活力(25℃、湿品)大于等于50u/g（9）产品保质期从生产之日起为六个月B、主要技术经济指标（1）经济效益项目完成后可以达到年产3吨重组生物酶制剂D-氨基酸氧化酶的生产能力，按每千克3165元人民币计算，可以实现年销售收入950万元，净利润达到190万元，纳税达到101万元。（2）项目产品达到国际先进水平，国内先进水平，完全替代国内进口同类产品，产品的价格和质量完全优于国外进口同类产品。（3）可以提升我国重组生物酶制剂行业在国际市场上的竞争力。（4）提升公司在生物技术行业的影响力，促进鹤壁市生物技术产业的发展。2（5）解决劳动力就业问题二、项目执行情况；实施解决的关键技术和主要创新点；项目完成后基础设施建设情况1、项目执行情况河南兴鹤电子有限公司与北京中科院微生物研究所联合申请的“重组生物酶制剂开发”项目获得省科学院审批通过后，公司为了项目的顺利实施，首先通过招聘的方式从大学院校接受本科生6名，充实加强研发团队，同时先后派遣两批次4名技术骨干赴北京进行为期6个月的专项技术培训。其次，公司通过优化组合为实验室和生产车间建成了700平米的防静电密闭式厂房，并且聘请专业团队设计和建设符合国家标准的实验室以及相关的小试、中试发酵设备。再次，对生产工艺从实验室到工业生产的过程转换进行了试运行（包括试验基地、中试线、生产线、示范点等）。第四，发酵小试、中试设备，多功能提取罐、恒温干燥箱、冷冰干燥机、高效液相色谱仪、细胞粉碎机、在线控制系统等研发试验生产设备已就绪。2、实施解决的关键技术和主要创新点（1）实施解决的关键技术■通过现代蛋白质工程的方法提高D-氨基酸氧化酶的活性和可溶性表达水平；■建立一条高密度发酵生产技术线，使其发酵产酶量达到1-3克/升，达到10000单位/升；■构建一种新的蛋白质表达系统，D-氨基酸氧化酶可以在原核菌3株大肠杆菌中进行高水平的表达，可溶性蛋白占细胞总蛋白的40%以上。■采用板式换热器连消灭菌的方法，以达到灭菌温度稳定，时间短，效果好，营养成分破坏小，既节省了原材料，还提高了菌体生长效率，符合最佳高密度细胞培养的要求。■攻克膜分离技术，达到提高最终产品的质量和收率。（2）主要创新点（1）提取纯化，最终产品质量优于国内同行业产品，不低于世界同行业水平；（2）在发酵罐系统中稳定生产，产量和质量水平稳定较高，工艺成熟，能尽快应用到规模化工业生产中；（3）突破重组生物酶制剂D-氨基酸氧化酶成果转化，实现小批量生产规模。三、产学研联合开展研究开发及成果推广应用情况。河南兴鹤电子有限公司于2013年6月与中国科学院微生物...