课题3:血红蛋白的提取和别离第一页，共十六页。PCR反响需提供的条件1:缓冲液中进行2:DNA模板3:分别与两条模板链相结合的两种引物4:四种脱氧核苷酸5：耐热的DNA聚合酶6：同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行第二页，共十六页。5引物15引物2第二次复制第一次复制555555模板DNA5555555525～30次循环〔复制〕后，模板DNA的含量可以扩大100万〔220〕倍以上。第三页，共十六页。体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制PCR技术解旋引物一般用DNA片段DNA聚合酶细胞自身的DNA聚合酶（不耐高温）TaqDNA聚合酶复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一端开始复制。复制的方向子链的5’端向3’端延伸子链的5’端向3’端延伸在解旋酶作用下，细胞提供ATP，局部解开加热到94oC,双链全部解开，不需解旋酶一小段RNA第四页，共十六页。血红蛋白介绍：血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白是由574个氨基酸脱水缩合而成的含有四条肽链的蛋白质〔两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素〕。氧气结合在铁原子上，被血液运输。因含血红素血红蛋白呈红色。血红蛋白占红细胞干重97%、总重的35%。平均每克血红蛋白可结合1.34ml的氧气，是血浆溶氧量的70倍。一个哺乳动物血红蛋白分子可以结合最多四个氧分子。血红蛋白也参与其他气体的转运：它能携带机体的局部二氧化碳〔大约10%〕。第五页，共十六页。回忆：蛋白质根本单位？合成场所？蛋白质的分子结构具有多样性的直接原因？根本原因？蛋白质的功能？思考：蛋白质的别离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来别离不同蛋白质。主要功能实例组成细胞的结构成分细胞膜中的蛋白质，染色体中的蛋白质等运输功能细胞膜上的载体蛋白、运输氧气的血红蛋白等催化功能胃蛋白酶、纤维素酶等调节功能生长激素、胰岛素等激素免疫功能B淋巴细胞受到抗原刺激后产生的抗体第六页，共十六页。一、根底知识：㈠凝胶色谱法〔分配色谱法〕：1、凝胶：一些微小多孔的球体〔内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖〕2、概念：根据相对分子质量的大小别离蛋白质的方法第七页，共十六页。3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对〔〕的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程〔〕，移动速度〔〕，而〔〕的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在〔〕移动，路程〔〕，移动速度〔〕，相对分子质量不同的蛋白质因此得以别离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快〔分子筛效应〕第八页，共十六页。用凝胶色谱法别离蛋白质时，分子量大的蛋白质()A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快4、具体过程D第九页，共十六页。第十页，共十六页。相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B第十一页，共十六页。㈡缓冲溶液：2、作用：能够抵抗〔〕对溶液的〔〕的影响，维持PH根本不变。外界的酸或碱PH值1、组成：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成如:H2CO3/NaHCO3;CH3COONa/CH3COOH，NaH2PO4/Na2HPO4;KH2PO4/K2HPO4等3、缓冲溶液的配制:通常由1-2种缓冲剂溶解于水中配制而成。第十二页，共十六页。㈢电泳：1、概念：2、原理：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。从而实现样品中各种不同蛋白质分子的别离。第十三页，共十六页。3.分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定〔〕通常用SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量第十四页，共十六页。使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异第十五页，共十六页。内容总结课题3:血红蛋白的提取和别离。25～30次循环〔复...
