Hela细胞的传代培养VIP免费

HeLa细胞的传代培养第一页，共十八页。教学目标1.理解细胞传代培养的概念和原理2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作第二页，共十八页。细胞传代培养的概念概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。第三页，共十八页。培养细胞一代生长过程第四页，共十八页。实验前准备1、材料：HeLa细胞2、试剂：0.25％胰蛋白酶、1640培养基〔含10％小牛血清〕、PBS第五页，共十八页。实验前准备超净工作台CO2培养箱倒置显微镜3.仪器设备第六页，共十八页。离心机恒温水浴锅3.仪器设备实验前准备第七页，共十八页。培养瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。3.仪器设备实验前准备第八页，共十八页。〔1〕细胞培养用的器材和试剂灭菌；〔2〕超净工作台准备〔75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min〕；〔3〕试剂预热〔37℃水浴锅〕；〔4〕操作人员准备〔75%酒精擦拭双手等〕。4.实验前准备工作实验前准备细胞生存环境：无菌、无毒第九页，共十八页。细胞传代操作1、倒去培养瓶中的旧培养液，参加2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞外表的碎片。吸除培养液第十页，共十八页。细胞传代操作2、胰蛋白酶消化：参加适量0.25％胰蛋白酶消化液，37℃消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。加消化液第十一页，共十八页。细胞传代操作3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，参加适量预热后的培养液终止消化。〔一般消化时间约为2-3分钟〕。消化前细胞消化后细胞〔适度状态〕吸除消化液第十二页，共十八页。细胞传代操作4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。吹打成细胞悬液第十三页，共十八页。分装细胞传代操作5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37CO2℃培养箱培养〔如果瓶盖不带通气孔，那么需将瓶盖旋开半圈〕。24h后即可对细胞的生长情况进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。第十四页，共十八页。实验操作本卷须知1.用电平安2.操作仪器平安3.及时标准记录第十五页，共十八页。HeLa细胞传代培养实验原理细胞在培养瓶长成致密单层后，已根本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代〔再培养〕。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。第十六页，共十八页。Thankyou第十七页，共十八页。内容总结HeLa细胞的传代培养。概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。0.25％胰蛋白酶、1640培养基〔含10％。〔2〕超净工作台准备〔75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min〕。〔3〕试剂预热〔37℃水浴锅〕。〔4〕操作人员准备〔75%酒精擦拭双手等〕第十八页，共十八页。