生命科学导论实验一细胞形态结构观察及显微镜的使用实验一细胞形态结构观察和光学显微镜的使用一.实验目的1.了解和掌握普通光学显微镜的的基本原理和操作规程。2.了解细胞的基本形态结构。3.通过比较不同细胞形态，了解正常肝细胞与脂肪肝细胞的基本形态结构及区别。二.实验原理细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。基础知识显微镜概述：显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。1.光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成：①照明系统：包括光源和聚光器。②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台)、调节器和、物镜转换器(旋转器)等。尼康E-600显微镜2.荧光显微镜尼康E800荧光DIC显微镜荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）3.激光共聚焦扫描显微镜LCSM照片蓝色为细胞核，绿色为微管4.暗视野显微镜暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。5.相差显微镜一种介壳虫的染色体6.偏光显微镜偏光显微镜（polarizingmicroscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。7.微分干涉差显微镜DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。DIC显微镜下的硅藻（伪彩色）8.倒置显微镜9.透射电子显微镜JEM-1011透射电子显微镜莱卡超薄切片机内质网透射电镜图（伪彩色）冰冻蚀刻电镜照片10.扫描电子显微镜JEOL扫描电子显微镜人类血细胞SEM照片11.显微操作技术尼康NT-88NE显微操作/注射仪在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)10×0.255.4040×0.650.39100×1.300.11显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，公式为:M=K1xK2焦点深度:显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。三、实验程序(一)显微镜的使用1.观察前的准备工作(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。(3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。瞳距调节2.显微镜的调节屈光度调节调节粗调松紧调节旋钮粗调松紧调节旋钮聚光镜中心调节聚光镜中心调节⑤⑤光轴中心调光轴中心调节螺钉节螺钉③③视场视场光栏光栏③③孔径孔径光栏光栏②②10X10X物物镜镜①①标本标本④④聚光镜升聚光镜升降旋钮降旋钮3.观察操作：(1)低、高倍镜的使用:先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。(2)兔肝细胞苏木精-伊红(H·E·)染色玻片标本的观察先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染色区别等。(3)脂肪肝细胞标本观察细胞浆内出现的脂滴超过生理范围，或正常不出现脂滴的细胞中出现脂滴，即称为脂肪变。肝脏是脂肪酸代谢的主要器官，肝脂肪变较常见，严重时几乎所有的肝细胞均发生脂肪变，...
