火棉胶切片(celloidinsectionsmethod)火棉胶(collodion)又称硝化纤维,由浓硝酸和浓硫酸作用于脱脂棉而成。特点:火棉胶易溶于乙醚和酒精混合液,易燃烧。制片过程不经过加温包埋,故减少了组织收缩和过度硬化。适用于大快或较坚硬的组织,常用于眼球、内耳、肌腱、脱钙骨、软骨成骨、膜内成骨和神经组织的许多特殊染色方法。缺点:制片时间长,切片厚,操作复杂。一、火棉胶的配制1.火棉胶有固体和液体两种固体火棉胶用无水酒精和等量乙醚混合液溶解,配制成5%、10%。。。。液体火棉胶备用。2.摇动使其加速溶解3.密闭闭光保存,防止乙醚和酒精的挥发。4.配制火棉胶要保持绝对无水。5.配制火棉胶要严禁烟火、高温和猛烈打击,避免引起燃烧或爆炸二、组织固定固定方法同石蜡切片,但是不易用含有苦味酸的固定液。三、脱水脱水时间要长一些,彻底除去组织中的水分。50%酒精24-36小时70%酒精24-36小时80%酒精12-24小时95%(Ⅰ)酒精12-16小时95%(Ⅱ)酒精12-16小时100%(Ⅰ)酒精8-12小时100%(Ⅱ)酒精8-12小时四、浸透1:1酒精乙醚12-24小时5%火棉胶4-6天10%火棉胶6-8天15%火棉胶8-106天20%火棉胶10-15天五、包埋20%火棉胶包埋用少量三氯甲烷使其硬化。放置70%酒精中长期保存。六、切片切片厚度10-15cm七、染色----贴片-----脱水和封固第三章骨切片的制作技术概述一、骨磨片1、空气封闭制片法染色结果(1)取材取经过固定的人长骨一段,用细钢锯锯成1mm左右的骨片,纵切和横切个一。(2)研磨分为人工和机器,先粗磨至100um再细磨50um(3)脱水与脱脂洗涤酒精脱水乙醚30分钟脱脂干燥封固观察结果二、骨切片1、取材取长骨骨干,厚度0.5-1cm为宜.2.固定(1)10%或25%甲醛水溶液固定24-36小时.(2)muller重铬酸钾2.5g硫酸钠1g蒸馏水100ml(3)Zenker(4)Zenker甲醛固定液Zenker液45ml甲醛5ml,该液对骨组织固定较好.3.脱钙分类:酸类单纯脱钙法,酸类混合脱钙法,离子交换树脂法,电离脱钙法,脱钙机法.(1)酸类单纯脱钙法甲酸:10%或25%甲酸水溶液,2天更换一次.5%或8%的硝酸水溶液.5%盐酸水溶液.(2)酸类混合脱钙法①甲酸为主的混合脱钙剂Gooding;Stewant’s液甲酸5-25ml、甲醛5ml、蒸馏水加到100ml。密质骨5-10天完成脱钙。②盐酸为主的混合脱钙剂(VonEbner’s液)盐酸5ml、氯化钠175g、蒸馏水100ml,用时每200ml液内每日添加浓盐酸1ml③硝酸为主的混合脱钙剂(Schcidde’s液)硝酸20ml、甲醛10ml、蒸馏水70ml,脱钙快速、完全,如果加温可以在数小时完成脱钙。(3)离子交换树脂脱钙法将氨型磺化树脂铺于容器底部,厚为1.5cm,将标本放置树胶上面,加入脱钙剂。乙二胺四乙酸(EDTA)(4)电解脱钙法电解脱钙法是将两电极插入脱钙剂中,使脱钙剂中有电流通过,将液中钙离子吸引到阴极,从而发生电离作用,加速脱钙过程。该方法可以用于大量标本或大标本的制作。(5)脱钙机脱钙法大部分脱钙机原为加热恒温法、电离法、超大型声波法、真空减压法等。还要靠酸类脱钙剂,组织容易破坏,影响染色,优点是脱钙速度快。4脱钙后流水冲洗12-24小时5用5%硫酸钠浸泡8-12小时中和强酸。6流水再冲洗8-12小时。7可以用冰冻切片,也可以用石蜡或火棉胶切片。其他制片技术冰冻切片、涂片、铺片