专题一：专题2细胞工程细胞工程动物体细胞核移植技术和克隆动物2.2.1动物细胞培养和核移植技术常用的技术手段动物细胞培养（基础）动物细胞融合单克隆抗体制备动物体细胞核移植技术和克隆动物复习问题1、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？问题2：为什么用胰蛋白酶处理？分散成单个细胞便于物质交换，使营养物质吸收及代谢废物排出更容易，利于细胞生长和繁殖问题3：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。复习问题4：几个概念？•原代培养：•从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与繁殖10代以内的细胞称为原代细胞培养。•传代培养：•将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。复习细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。复习动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液原代培养胰蛋白酶剪碎细胞株细胞系复习问题5：过程？问题6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？问题7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体复习问题8、动物细胞培养的原理：问题9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代以内，为什么？二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和保存10代以内的细胞，因为其生物学特性未发生大的变化，最接近于体内组织或细胞的生长特性，很适合用于药物测试、基因表达等实验研究。复习点击此处添加标题文字问题10：为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。学习目标1.简述动物体细胞核移植技术的过程2.简述克隆动物的过程和应用前景。重点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程2.2.1动物细胞培养和核移植技术•随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，全能性表达很难，但细胞核内仍含有该物种所需的全套遗传基因，具有发育成完整个体的潜能，即细胞核仍具有全能性•条件：只有动物的细胞核是不行的，必须提供促进细胞核表达全能性的物质和营养条件，去核的卵母细胞是最合适的细胞，因为卵母细胞体积大、易操作，含有促进促进细胞核表达全能性的物质和营养条件动物细胞全能性的特点？二、动物体细胞核移植技术和克隆动物2.原理:1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。细胞核的全能性3.核移植种类（难度高）受体细胞：MⅡ期的卵母细胞胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程...
