难点剖析知识·巧学一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖
进行动物细胞培养时,首先将组织块剪碎,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,使其分散成许多单个细胞,然后,用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液,再将细胞悬液放入培养瓶内置于适宜环境中培养
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁
以后,细胞进行有丝分裂,数目不断增多
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制
人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养
贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分别继续培养,让细胞继续增殖,这样的培养过程通常被称为传代培养
记忆要诀动物细胞培养的流程:取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞,制成细胞悬液→转入培养液中进行传代培养→放入二氧化碳培养箱中培养
(1)无毒无菌的环境:培养液应进行无菌处理
(2)营养:合成培养基成分包括糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素,通常需加入血清、血浆等
(3)适宜温度:一般与动物体温相近
(4)pH:7
(5)气体环境:空气95%,二氧化碳5%
误区警示用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质
胃蛋白酶作用的适宜pH约为2,当pH大于6时,胃蛋白酶就会失去活性
胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7
多数动物细胞培养的适宜pH为7
4,胃蛋白酶在此环境中没有活性,而胰蛋白酶在此环境中活性较高,因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化
动物细胞培养技术有很多用途
许多有重要价值的生物制品,如:病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等,都可以借助动物细胞的大规模培养来生产
疑点突破细胞的衰老与动物机体的