细胞培养技术VIP免费

细胞培养技术细胞培养也叫细胞克隆技术。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。什么是细胞培养？主要内容实验设备试剂及耗材清洗及灭菌细胞培养（细胞生长过程，细胞来源，细胞复苏、传代及冻存，细胞计数，活力测定，细胞污染）一实验设备超净工作台，生物安全柜CO2培养箱倒置显微镜离心机电热恒温水槽液氮罐纯水仪压力蒸汽消毒器电热干燥箱超净台生物安全柜酒精灯（√），离开要熄灭！酒精灯（×）CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2。倒置显微镜离心机电热恒温水槽液氮：-196℃液氮罐纯水仪压力蒸汽灭菌器电热干燥箱由工作人员操作，注意安全！小结一实验设备及功能（酒精灯安全）二试剂及耗材培养基缓冲液消化液血清其他耗材培养基供给细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。成分及作用：•氨基酸：组成蛋白质的基本单位•碳水化合物：能量来源•无机盐：帮助细胞维持渗透压平衡•维生素：维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用培养基分类•DMEM（高糖，葡萄糖4500mg/L）：成纤维、上皮细胞（293），一些实体瘤（Panc-1），原代神经元•DMEM（低糖，葡萄糖1000mg/L）：间充质干细胞，单抗细胞融合•RPMI1640：血液细胞（HL60）、一些实体瘤细胞（BT474）酚红：PH指示剂（黄色过酸、紫色过碱）；酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素），涉及到激素和诱导的实验，建议选用无酚红培养基。ATCChttps://www.atcc.org/美国模式培养物集存库缓冲液（洗涤细胞）PBS：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液（常规实验皆可用）。（Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl）D-PBS：杜氏磷酸缓冲液，磷酸盐含量稍低，含有钙镁离子，用于胚胎学方面的研究。Hanks：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物细胞的水平，可作为动植物细胞短期培养(几个小时)。D-Hank’s：不含钙离子、镁离子、葡萄糖（使用消化液时）。消化液提供基本营养物质、激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。保存血清最好的方法？建议血清保存在-20℃。解冻后存放于4℃时，请勿超过一个月。（分装）如何解冻血清才不会使产品质量受损?建议从冷冻箱取出后，置于2～8℃冰箱使之缓慢解冻、融解。使用时，必须将解冻的血清充分混匀，并且勿将血清置于37℃太久。血清青霉素-链霉素溶液青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。分别阻止细菌细胞壁合成及细菌蛋白质的组成，达到抑制细菌生长的作用，防止污染，对真菌和支原体无效。其他实验所需的试剂：药物（如ATRA）、检测试剂（如MTT）、细胞因子（如SCF）等试剂标注规范试剂名称NaCl配制浓度0.5mM配制人张三配制日期2016.10.21耗材培养皿、瓶、孔板离心管、移液管枪尖其他小结二试剂及耗材的分类及用途培养基（成分、分类）缓冲液（PBS、Hanks等）消化液（分类及应用）血清（作用、存储及解冻方法）试剂标签要规范耗材（分类、用途）在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感,均能影响培养细胞的生长微生物产品附带杂物上次细胞残留物非营养成分的化学物质需要清洗的培养用品:玻璃器皿、部分需要回收的塑料制品。（包括：浸泡（洁消精）、超声波清洗、冲洗、烘干四个步骤）三清洗及灭菌消毒灭菌方法物理消毒灭菌法Co60辐射（γ射线）：破坏生物大分子（塑料制品）紫外线（200-300nm）：30min，阻止细菌、病毒核酸合成。（细胞室：用于空气，操作台表面等）湿热（高压蒸气灭菌法）：121℃，20min，破坏微生物孢子、蛋白变性。（用于大量液体、玻璃器皿、部分塑料耗材、手术器械等，由工作人员操作）干热：160,2℃小时，高热作用下的氧化作用破坏微生物（耐高温的玻璃和金属制品）过滤：0.22μm滤膜过滤除菌（少量试剂）消毒灭菌方法化学消毒灭菌法75%酒精主要用于操作者的皮肤，操...