实验四（一）球菌病原学的检测实验内容1球菌形态观察2血浆凝固酶试验3抗“O”试验实验目的1掌握葡萄球菌，链球菌，淋球菌形态特征2熟悉血浆凝固酶实验的原理，方法及临床意义。3掌握抗“O”实验的原理，意义及方法。4触酶试验试验球菌的检验程序标本标本直接检查（涂片、染色、镜检）直接检查（涂片、染色、镜检）分离培养分离培养可疑菌落可疑菌落菌落特点菌落特点鉴定试验鉴定试验第一次第二次生化结果观察荚膜染色结果讨论与分析生化结果观察荚膜染色结果讨论与分析第三次形态、色素、溶血血浆凝固酶、触酶、菊糖发酵、甘露醇发酵、胆汁溶菌、小白鼠毒力试验常见致病性球菌染色特点葡萄球菌链球菌双球菌革兰阳性革兰阳性革兰阳性革兰阳性革兰阳性革兰阳性不规则成堆排列不规则成堆排列链状排列链状排列矛头状成双排列矛头状成双排列脑膜炎奈瑟球菌淋病奈瑟菌革兰阴性球菌奈瑟菌染色特点：肾形或豆形，成双排列、凹面相对的革兰阴性球菌•菌落可出现金黄色、白色或柠檬色等色素•血平板上，金黄色葡萄球菌可形成-溶血环表皮葡萄球菌呈白色菌落葡萄球菌在血平板上菌落链球菌属（Streptococcus）链球菌在血平板有三种溶血现象（1）甲型溶血（2）乙型溶血（3）丙型溶血132链球菌菌落形态血平板：灰白色圆形凸起的细小菌落，不同菌株溶血不一。化脓性链球菌草绿色链球菌肺炎链球菌菌落1.血浆凝固酶试验【原理】致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，附于细胞表面生成凝块。【操作】取生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，用接种环挑取细菌，混合后观察有无自凝现象。取1滴兔血浆混匀分别滴于载玻片上,观察有凝固现象（3-5s）。【结果】金黄色葡萄球菌为阳性，表皮葡萄球菌为阴性【意义】血浆凝固酶试验可区分致血浆凝固酶试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌病性和非致病性葡萄球菌生化反应鉴定示教示教2.触酶试验【原理】H2O2H2O+O2【操作】取洁净玻片一张，取生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，以接种环分别取待检细菌培养物少许，滴加3％H202一滴（立刻），在H202中磨匀，立即观察结果。【结果】阳性为半分种内产生大量气泡。葡萄球菌为阳性，链球菌为阴性。【意义】触酶试验可区分葡萄球菌和链球菌。触酶试验可区分葡萄球菌和链球菌。生化反应鉴定过氧化氢酶过氧化氢酶示教示教3.甘露醇发酵试验【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经37℃孵育18-24h观察结果。【结果】金黄色葡萄球菌为阳性，表皮葡萄球菌为阴性血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌和非致病性葡萄球菌生化反应鉴定4.菊糖发酵试验【原理】大多数肺炎链球菌可以分解菊糖，菊糖发酵产酸，指示剂呈酸性反应，发酵管由黄色变为紫红色。【操作】细菌分别接种菊糖发酵管，经37℃孵育18-24h观察结果。【结果】用以区分肺炎链球菌和甲型链球菌，肺炎链球菌为阳性，甲型链球菌为阴性。生化反应鉴定5.胆汁溶菌试验【原理】肺炎链球菌可产生一种自溶酶，胆盐能活化自溶酶，加速自溶过程，引起细胞自溶。【操作】胆汁溶菌试验可用以区分甲型链球菌和胆汁溶菌试验可用以区分甲型链球菌和肺炎链球菌肺炎链球菌生化反应鉴定37℃，24h37℃，24h+胆盐（0.1ml）+胆盐（0.1ml）37℃，0.5h37℃，0.5h【结果】液体由混浊变透明为阳性，肺炎链球菌为阳性，甲型链球菌为阴性。【意义】【结果】液体由混浊变透明为阳性，肺炎链球菌为阳性，甲型链球菌为阴性。【意义】接种细菌接种细菌生化反应鉴定6.抗链球菌溶血素“O”（ASO）试验（快速胶乳法）【原理】本试剂胶乳液是由溶血素O和羟化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳。ASO胶乳的灵敏度调整到200IU/ml，超过上述滴度即出现肉眼可见凝集颗粒，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。【操作】试剂预温至室温，并轻轻摇匀。在反应板各格子上分别滴加1滴(约50μl)阴性、阳性和待测血清，再各滴加ASO胶乳试剂1滴，轻轻摇匀，2min后观察结果。【结果】有清晰凝聚者为阳性（ASO≥200IU/m...
