细胞工程理论初级基础VIP免费

第三章细胞工程的理论基础体外培养的种类二、细胞培养的现实意义三、细胞培养的优点1.研究的对象是活细胞在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测，甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。2.研究条件可以人为控制可以根据需要，控制包括pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理、化学的条件，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。3.研究的样本可以达到比较均一性通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。四、细胞培养的缺点因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能，又具有某些改变的，特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。五、细胞培养的工作原则有标准化的工作方法培养用的液体极多（如培养液、胰蛋白酶、HANKS液及抗菌素等），应由专人负责，并保证做到按规程行事，配制浓度准确，灭菌可靠，所有配好的溶液瓶上都要标明名称、浓度、消毒与否和制备日期等。一切培养用品都要有固定的存放点，避免杂乱无章，其中尤其重要的是：培养用品与非培养用品应严格分开，已消毒品与未消毒品应分别存放。第二节组织培养的细胞生物学一、体内外细胞的差异和分化（一）体内外细胞的差异培养细胞最多见的表现是：失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显，出现类似“反祖”现象；表现为细胞趋单一化，或获得不死性，或变成具有恶性性状的细胞群。（二）培养细胞的分化1．不适应(Deadaption)：表现为，细胞在原体内时所拥有的分化特性减弱或不显，如肝细胞产生酪氨酸转移酶(TyrosineAminotranserase)特性的丧失.2．脱分化或去分化(Dedifferentiation)细胞也可能出现脱分化或去分化，即细胞失掉发生分化的能力。二、培养细胞形态分类体外培养细胞类型（1）——上皮细胞型体外培养细胞类型（2）——成纤维细胞型HL-60分化细胞Giemsa染色1.细胞种类：HL-60；2.培养的天数：ATRA1微摩尔作用5天；3.放大倍速：倒置显微镜X10；4.培养基种类：1640+8％胎牛血清；5.细胞状态与特征简述：悬浮细胞，分化的细胞核浆比例减小，核仁减少或消失，胞核呈杆状或分叶状。KU8121.细胞种类：人嗜碱细胞性白血病细胞系；2.培养的天数：5d；3.放大倍速：倒置显微镜X20；4.培养基种类：RPMI1640+10%新生牛血清；5.细胞状态与特征简述：细胞呈圆形，悬浮生长。HeLa细胞1.细胞种类：人HeLa细胞传代培养；2.培养的天数：7d；3.放大倍速：倒置显微镜X200；4.培养基种类：DMEM+10%小牛血清；5.细胞状态与特征简述：细胞呈多角形，贴壁生长。K562细胞1.细胞种类：K562（人慢性红白血病细胞株）；2.培养的天数：传代后2天；3.放大倍数：倒置显微镜X10；4.培养基种类：RPMI1640+10%胎牛血清，4mMGlutamine；5.细胞状态与特征简介：悬浮生长，少数贴壁，喜爱成团悬浮。三、培养细胞的生长特点（一）贴附（二）接触抑制（三）密度抑制四、培养细胞的生长和增殖过程（一）组织培养细胞生命期(LifeSpanofCultureCells)培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。包括原代培养期、传代培养期及衰退期。正常培养的细胞周期原代培养(PrimaryCulture)期也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。传代期特点：在全生命期中此期的持续时间最长，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型。传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系（CellLine）。衰退期特点：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后衰退凋亡。（二）体外培养细胞一代生存期潜伏期指数增生期停滞期所谓细胞...