1肿瘤细胞增殖动力学细胞生物学系刘清华bjqinghual@vip.sina.com1.WhatKindofDiseaseIsCancer?SomeCases病例1：男性76岁，2003年9月3日因干咳、少痰、消瘦就诊。CT检查确诊肺癌病例3：女性43岁，因上腹部时有疼痛伴返酸2年、加重1个月入院。胃镜活检报告：胃幽门部黏膜内低分化癌。病例8：患者男性，34岁。因发现右锁骨肿块3月入院。检查右锁骨外段稍隆起，局部膨大，表面皮肤无红肿或静脉怒张，无疼痛；肩关节活动稍受限。X光示右锁骨外段明显骨质破坏及增生。病理报告为右锁骨恶性淋巴细胞瘤。病例11：女性68岁，阴道不规则流血4-5个月。妇科检查：子宫前位，如妊娠2月大小，可触及数个结节，质地中等。超声检查提示子宫混合性占位性病变。CT诊断：宫体癌，右侧卵巢囊肿。病理诊断：子宫恶性混合性苗勒氏瘤，累及输尿管。肿瘤学癌发生癌演进临床表现癌治疗癌诊断CELLCelljunctionProliferationExtracellularmatrixTelomereSignaltransductionDifferentiationApoptosis2.WhatWeHaveKnownabouttheCellCycleControl?OncogeneAntioncogeneCheckpointsCellDivisionCycleGene,cdcgenes;CyclinsCyclinDependentKinases,CDKsCyclinDependentKinasesInhibitors,CDKIsSphasePromotingFactor,SPFMaturationPromotingFactor,MPF蛋白质水平基因水平3.HowtoControlinaNormalCell?ControlofG1phaseControlofSphaseControlofG2phaseControlofMphaseControlofG1phaseProliferationfactorsCheckpoint（G0／G1entrance、RPointG1／S）Cyclin-CDK（cyclinD-CDK4／6、cyclinE-CDK2）P105RBCDKIControlofSphaseCheckpoint(DNAsynthesison、off)Cyclin－CDKPCNASPF(cyclinA-CDK1)CyclinE-CDK2作为启动蛋白，识别autonomouslyreplicatingsequence，ARS，激活复制起点可能是originrecognitioncomplex，ORC的组成部分Cyclin－CDKPCNA细胞增殖核抗原DNA聚合酶δ的亚基直接参与DNA复制和修复ControlofMphaseCheckpointMPF（cyclinB-CDK1)CheckpointG2／M：DNA复制没有完成，激活wee1-mik1蛋白激酶，细胞阻滞于G2期。M中／晚期：检查微管蛋白的量、微管组织中心功能、纺锤体极性、微管与动粒附着、或附着在动粒上产生的张力。MPF的活性调节4.What’sWronginaTumorCell?oncogene的过表达antioncogene的失活cyclin基因和表达蛋白的异常cdki基因和表达蛋白的异常5.HowtoEvaluateCellProliferation?CellProliferationKinetics研究生物体内各种细胞群体在新生、增殖、消亡过程中处于各种状态的细胞数量、时间参数和分布位置的技术手段。检测方法1.细胞计数2.生长曲线3.倍增时间4.生长分数5.丢失系数6.标记指数7.分裂指数8.细胞周期参数1.CellCounting直接计数－－台盼蓝计数法比色半定量－－四唑盐法四唑盐法[3-4,4-二甲基噻唑－2]，5－二苯基四氮唑溴盐，简称MTT;线粒体的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物;比色测定间接反映活细胞数量。细胞培养显色:加入MTT溶液(5mg/ml)，继续培养4h，加DMSO，振荡10min比色：490nm波长测定光吸收值BreastCancerResearchandTreatmeat2004;84:251-2606.TheirResearchStrategy?7.TheTechnologyTheyUsed?2.GrowthCurveCellculture;Cellcounting：每次至少3瓶，每瓶至少3次，取平均数；共做7天；作图：培养时间为横坐标，细胞数为纵坐标，在对数坐标纸上作图。0.10246810Time/dayCancerCellNormalCell0.11101001000单层培养CellNumber0.10246810Time/day0.11101001000CellNumber悬浮培养NormalCellCancerCell3.DoublingTimeInvivo:DT=0.1×t/logDt–logDoDo:首次测得的肿瘤直径（cm）Dt:t时间后测得的直径（cm）ComputedTomography某转移癌：Do＝2，Dt＝4，t＝90DT=0.1×90/0.6-0.3=30(d)effectivedoublingtime,TDeff：考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间potentialdoublingtime,TDpot：不考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间原发性肺癌腺癌6421鳞癌8512间变性癌5511乳腺癌1714结－直肠癌1990淋巴瘤274肿瘤类型病例数倍增时间（周）780例人体肿瘤体积倍增时间Steel（1977）（未完）4.GrowthFraction，GF肿瘤中增殖细胞占细胞总数的比例GF=P/P+QP:proliferationQ：quiescent5.丢失...
