临床基因扩增实验室质量管理体系的建立2013.10.21From福建省临床基因扩增检验实验室规范化培训暨技术人员培训班卫生部临床检验中心李金明ContentsPCR技术介绍；质量管理体系的建立；质量保证；质控规则；PCR技术高温TargetSequenceTargetSequence较低温度Primer1Primer2TargetSequence最适温度123实时荧光定量PCR模板起始浓度越高，荧光信号强度达到域值所需的循环数越少，即Ct值越小。荧光值未知浓度样本循环数n循环数n荧光值已知浓度系列标准品模板起始浓度的常用对数与Ct值呈负线性关系。log起始浓度Ct值标准曲线无基因无核酸的重要性•严格分区（一区→二区→三区）；•开窗通风；•用次氯酸钠擦洗地面和台面，甚至墙面；•增长紫外照射的时间；•用75%乙醇空中喷雾；•实验前的处理程序和实验后的处理程序；核酸污染的来源•临床标本中存在的大量待测微生物•科研中得到的质粒克隆•以前分析研究的特定微生物•大量存在于实验环境中的特定微生物•以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验室最容易产生的，将造成假阳性的“污染”。Next质量体系文件的编写•基本原则：最有效+符合实际；•三大特性：①法规性：一旦批准必须认真执行；②唯一性：一个检验活动只能有唯一的操作程序；③适用性：要符合实际，具有可操作性；•SOP包含的内容：5W+1H；•SOP呈现方式：图片+文字；PCR实验室的质量体系文件•检测项目的性能验证；•项目检测的SOP;•仪器和设备的操作SOP；•仪器和设备的维护SOP；•人员的技术档案；•各种记录表格；表格记录仪器设备的维护校准SOP•日维护•周维护•定期维护•剂量单位校准•厂家校准人员的技术档案记录•一人一个档案；•个人基本情况；•培训证和上岗证；•论文、著作、成果等；•培训考核记录等；仪器设备的技术档案•一台仪器一个档案；•仪器的基本情况；•仪器的使用说明书；•仪器校准的记录；•维修维护的记录等；Next室内质量控制•由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度；旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本实验室常规工作中批内和批间样本检验的一致性，以确定测定工作的结果是否可靠、可否发出报告的一项工作；•改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，即对试剂准备、标本采集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出并严格执行“标准操作程序（SOP）”。室内质量控制•标本采集、运送和保存中的关键点:①容器——密闭、一次性、无菌、无核酸酶及扩增抑制物；②采集方法——人员训练有素、防污染、保存时间和温度；③合格标本——容器完整、量够、时间符合要求、外观符合要求、要猜到病原体等；第49-51页•为客观比较一个实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续和客观地评价实验室的测定结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性，这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。室间质量评价室间质评的档案袋•申请表；•接收记录；•保存记录；•实验记录；•结果上报表；•结果汇报表；•分析和改进内容；Next质控规则•质控规则的功能：判断测定批的失控还是在控；•失控处理：①查出原因；②采取措施；③保证消除；④不再出现；⑤纳入标准；防止同样的问题出现第二次是质量管理的“精髓”。符号定义•12S一个质控测定值超出±2s控制限。•13S一个质控测定值超出±3s控制限。•22S两个连续的质控测定值同时超出+2s或－2s控制限。•R4S同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4s控制限。•41S四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。•7T七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。•10X十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。质控规则的符号及其定义•“即刻法”和Levey-Jennings质控图法•“即刻法”的实质是一种统计学方法，即Grubs异常值取舍法；只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。•Levey-Jennings质控图法：稳定条件下，20个室内质控结果不应有多于1个结果超过2SD限度；在1000个测定结果中超过3SD的结果不多于3个。质控方法“即...
