病理新技术在子宫颈病理新技术在子宫颈CINCIN的应用的应用河南省人民医院病理科孔令非病理学新技术FISH原位杂交免疫组织化学生物传感器荧光原位杂交Fluorescenceinsituhybridization原理利用DNA碱基对的互补性,将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况FISH操作样本预处理脱蜡,脱水及水化,消化,探针、样本变性78℃探针+样本杂交45-50℃杂交后洗涤结果观察FISH探针种类CSP着丝粒探针GLP特异性位点探针染色体整臂探针FISH探针的类型全染色体涂抹探针(WCP)染色体计数(着丝粒)探针(CSP)位点特异性探针(GLP)单色特异性探针双色分离重排探针双色双融合易位探针IgHBcl2IGH/BCL2探针14(灰)号和18号(黑)染色体IgH基因Bcl-2基因杂交正常异常融合基因扩增双色双融合易位探针(IGH/BCL2)FISH的特点操作简单检测快速结果易观察灵敏性和特异性高可检测样本种类多空间定位精确FISH检测在临床中的应用产前诊断血液病检测实体瘤检测端粒,端粒酶及作用端粒是真核细胞染色体末端的特殊NDA-蛋白结构,其DNA含大量TTAGGG重复序列,在进化中高度保守DNA酶不能复制线性DNA(端粒是线性DNA)大多数体细胞的端粒会随周期性复制而缩短,最终达到一个使染色体完整性丧失的临界点,细胞增殖停止;许多肿瘤细胞端粒酶活性增高,是肿瘤细胞增殖的关键步骤作用:保护染色体基因组免受降解或重组为染色体末端提供一种可消耗的非编码序列,以缓解或取消末端复制所带来的染色体DNA进行性缩短生殖细胞具有端粒酶活性,其端粒不随年龄增加而缩短,故成为永生细胞端粒酶由RNA,DNA及蛋白质组成,本质是一种逆转录酶端粒酶活性决定于端粒酶RNA(humantelomeraseRNA,hTERC)和端粒酶催化亚单位(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)hTERC是端粒长度稳定的直接因素保持端粒稳定、基因组完整、细胞长期有活性和潜在的继续增殖能力人端粒酶基因位于3q26.3,该基因的扩增可阻止细胞凋亡,导致肿瘤产生宫颈脱落细胞及组织学FISH探针CSP3TERChTERC基因定位于3q26.33号染色体着丝粒信号0.0020.0040.0060.0080.00100.00120.00Norm/InflaCIN1CIN2CIN3SCCPathologicaldiagnosishTERCpositiverate(%)Center1Center2Center30.0020.0040.0060.0080.00100.00120.00Norm/InflaASCUSASC-HLSILHSILCytologicalresultshTERCpositiverate(%)Center1Center2Center3AllthethreecentersobtainedsimilarlyincreasingtrendofhTERCpositiveratesaccordingtotheseverityofcervicallesions,forbothcytologicalresultsandpathologicaldiagnosis.中国8350例子宫颈病变TERC扩增TBS分级正常/炎症ASCUSASC-HLSILHSILTERC基因扩增发生率(%)4.613.528.625.287.7病理分级正常/炎症CIN1CIN2CIN3浸润癌TERC基因扩增发生率(%)4.2-10.626.865.483.193.5hTERC检测临床意义伴有hTERC基因扩增的癌前病变的病人有52%-96%的恶变可能。可预测CIN1/CIN2向CIN3发展的风险因素,其灵敏度是100%,特异性是70%.FISH是早期诊断和风险预测的有效手段(AJPApril2005,Vol.166,No.4)hTERC基因检测在宫颈癌和宫颈癌前病变诊断中有重要价值魏丽惠,李亚里,吴瑞芳,陈忠,屠铮,江静,李静然北京大学人民医院妇科,北京,中国中国解放军总医院妇科,北京,中国北京大学深圳医院妇产科,深圳,中国犹他大学医学遗传学科,盐湖城,美国该研究显示,采用FISH技术检测hTERC基因扩增可在宫颈细胞学玻片上进行,具有无创性和客观性的特点,敏感度和特异度高,在宫颈癌和宫颈癌前病变的诊断中有重要价值。hTERC基因的异常扩增可能成为宫颈病变恶性进展的早期标记物。北京协和医院郎景和教授点评:在液基细胞学检查和检测人乳头状瘤病毒筛查宫颈癌的同时,检测hTERC基因,有望成为协助宫颈癌和宫颈癌前病变诊断及预测癌前病变是否向子宫颈癌发展的重要指标,而造福广大妇女。细胞非典型性发育异常细胞非典型性发育异常细胞癌变阻止细胞正常凋亡高危型HPV持续性感染人类染色体端粒酶基...