土壤中分解尿素的细菌的分离和计数-上课用VIP免费

一、课题背景一、课题背景11、尿素的利用、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。22、细菌利用尿素的原因、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NHCO(NH22))22脲酶脲酶+CO+CO22NHNH33+HH22OO33、常见的分解尿素的微生物、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。44、课题目的、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一一..研究思路研究思路㈠㈠..筛选菌株筛选菌株㈡㈡..统计菌落数目统计菌落数目㈢㈢..设置对照设置对照11、实例：、实例：启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。问：如果请你寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶（930C）。㈠㈠..筛选菌株筛选菌株问：为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来？水生耐热细菌Taq：美国科学家布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现，并分离出耐高温的TaqDNA聚合酶。原因：因为热泉温度70～800C，高温淘汰了绝大多数微生物（不耐热），只有Taq细菌被筛选出来。【研究思路】【研究思路】（一）筛选菌株原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。有选择作用要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置合适的培养基方法：⑴抑制大多数微生物生长⑵造成有利于该菌生长的环境，结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。22、实验室中微生物的筛选原理：、实验室中微生物的筛选原理：15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO4`4`7H7H22OO2.1g2.1gNaHNaH22POPO441.4g1.4gKHKH22POPO4433、、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？固体培养基②②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：碳源：葡萄糖、尿素氮源：氮源：尿素选择培养基培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能利用尿素作为氮源而生存。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。44、该培养基如何将分解尿素的细菌选择出来？、该培养基如何将分解尿素的细菌选择出来？选择培养基：选择培养基：在微生物学中，将允许特定在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。微生物生长的培养基。组别培养基类型是否涂布接种目的实验组以尿素为唯一氮源的选择性培养基是对照组牛肉膏蛋白胨培养基是分离尿素细菌用以判断选择性培养基是否具有选择性对设计实验的训练对照组牛肉膏蛋白胨培养基实验组以尿素为氮源的培养基【统计菌落数目】【统计菌落数目】常用方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法，还可以用过滤膜法11、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法（也叫活菌计数（也叫活菌计数法）法）（（11）原理）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。1个菌落=1个活菌稀释涂布平板法。稀释涂布平板法。（2）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数。（3）统计原则①、选30—300个菌落的平板统计。②、每个稀释度取3个平板取其平均值。（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数来表示。同学平板1平板2平板3平均数评价甲230230乙21212256163结论启示没有设置重复组，因此结果不具说服力。1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错...