CH50测定VIP专享VIP免费

血清总补体溶血活性测定补体是存在于血清中的一组不耐热的具有酶活性的球蛋白。补体是抗体发挥溶细胞或溶菌作用的补充条件。在正常情况下，补体含量相对稳定，但在某些疾病时可发生变化。动态监测血清总补体的活性，对一些疾病有辅助诊断的意义。概述概述实验原理绵羊红细胞（SRBC）与相应抗体结合形成的致敏红细胞可激活补体，从而导致SRBC溶解。当致敏红细胞的浓度一定时，在规定的反应时间内，溶血程度与补体的活性成正相关，但不是直线关系，为典型的S形曲线。在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化不能使溶血程度有显著改变，即溶血对补体量的变化不敏感。在半溶血（50％溶血）上下时曲线最陡，即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度也会发生较大的改变，也就是说对补体量的变化非常敏感。故采用50％溶血作为终点指标要比100％溶血敏感的多，这一方法称为补体50％溶血试验（complementhemolysis50％assay），简称为CH50。以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50单位，由此可以计算出待测血清中总的补体溶血活性，以U/ml表示。主要试剂与器材溶血素2％SRBCpH7.4巴比妥缓冲液（BBS）待测血清、蒸馏水离心机、试管、吸管、恒温水浴箱、分光光度计、比色杯等实验步骤1.稀释待测血清：吸取待测血清0.2ml，加BBS3.8ml，将血清1：20稀释（已完成）。2.正式实验取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂试管号BBS1：20稀释血清2％SRBC2U溶血素补体溶血活性123456789101.401.351.301.251.201.151.101.051.001.500.100.150.200.250.300.350.400.450.500.000.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5置37℃水浴30min2001331008066.657.15044.440-3.制备50％溶血标准管理论方法代替方法2％SRBC0.5ml4.5mlH2O++蒸馏水2ml2％SRBC0.5ml+17g/L高渗盐水2ml+2％SRBC0.5ml以上两种方法效果相同，所以实验中采用后者。使红细胞全部溶血形成等滲50％溶血管结果判断方法将各反应管经2500r/min、5min离心后，先用目测法观察其溶血程度，并与50％溶血标准管比较，选择与标准管最接近的两管。再用分光光度计于波长542nm进行比色测定。以BBS缓冲液为空白对照，校正零点，找出吸光度与标准管最接近的一管，根据该管的血清用量，求出总补体溶血活性。总补体活性（U/ml）＝1血清用量（ml）×稀释倍数实验结果写出标准管和选出的两管的吸光度，判断哪一管与标准管的透光率接近。计算总补体活性。注意事项待测血清必须新鲜，如放置室温2h以上，可使补体活性下降。待测血清还应该无溶血、无污染等。绵羊红细胞等试剂均应新鲜配制。实验器材应该清洁，残留的酸碱等化学物质均可使补体受破坏。补体的溶血活性可受多种因素的影响，如溶液的酸碱度变化、钙和镁离子增加等可使补体溶血活性降低。应用与评价本方法快速、简便，但敏感性较低，结果易受多种因素的影响。主要用于测定补体经典激活途径的溶血功能，不能测定补体蛋白的绝对值参考值：50-100U/ml增高：可见于急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤降低：多见于免疫复合物型超敏反应