Megazyme总淀粉测定试剂盒（K-TSTA04/2009）简介:酸水解法和酶法被广泛的应用于淀粉含量测定,酸水解法仅仅适用于纯净的淀粉样品,应用范围有限。酶法的前处理步骤上有各种变化，经过凝胶、液化和糊精化作用,糊精水解生成葡萄糖,最终以测量的葡萄糖计算淀粉含量。AACC方法76-11特殊之处在于：在高压蒸汽和碱性环境下淀粉糊化成为凝胶，然后再用淀粉葡糖苷酶将淀粉转化为葡萄糖进行测量。AACC方法76-11会低估某些样品的淀粉含量，包括高多糖玉米淀粉和众多的经过加工的谷物产品。今天应用的众多的测定方法都使用了联合处理方法,如在样品处理过程中或直接在淀粉凝胶化后使用耐热α-淀粉酶。对于难凝胶的样品(如高多糖玉米淀粉)使用了氢氧化钠或二甲基亚砜作为溶剂。为确保膳食纤维中的淀粉能够全部溶解，Englyst和Cummings(1988)总结的处理方法中使用了去分支酶,支链淀粉酶。为了测量极端样品得到满意结果，兼顾数量和可靠性，Megazyme提供了一个总淀粉分析试剂盒，基于使用耐热性淀粉酶和淀粉葡糖苷酶。这一方法已被AOAC和AACC采用(Method76.13)。最近，耐热淀粉酶可在低pH环境下使用。因此，我们更新了我们的总淀粉测量方法加入了这种酶。这一改进的最大益处在于可以在同一pH（pH5.0）条件下进行耐热性淀粉酶和淀粉葡糖苷酶孵育，简化步骤以及减少麦芽酮糖（抗耐热性淀粉酶和淀粉葡糖苷酶水解）的产生。另一改进是使用己糖激酶/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶/NADP+在D-葡萄糖处理步骤(K-TSHK5)。Megazyme总淀粉分析方法可以测量广泛范围内食品，饲料，植物和谷类产品（自然的或加工的）。对于大多数样品（例如小麦面粉），淀粉可以在100°C抗耐热性淀粉酶处理步骤中完全可溶。包含高水平抗性淀粉（例如高多糖含量玉米淀粉）样品，需要先用冷2MKOH或热DMSO进行预溶解。含可溶性淀粉和糊精的样品，无需进行抗耐热性淀粉酶处理。原理:抗耐热性淀粉酶水解淀粉为可溶性分支麦芽糊精和去分支麦芽糊精。样品中的抗性淀粉可用2MKOH进行预溶解，再用醋酸钠缓冲液进行中和再进行淀粉酶水解。或者用DMSO在100°C进行溶解。淀粉葡萄糖苷酶水解麦芽糊精至D-葡萄糖。D-葡萄糖氧化为D-葡萄糖酸脂，释放出(H2O2)，再用过氧化氢酶催化进行显色反应，产生醌亚胺染料。样品包含高水平的D-葡萄糖和麦芽糊精可以在分析前用80%乙醇进行洗涤。单个样品可在70分钟内完成测定。20个样品可在2小时内完成。特异性，灵敏度，线性范围和精确性此试剂盒专用于分析-葡聚糖（包括淀粉，糖原，植物糖原和非抗性麦芽糊精）。最小可区分的吸收值是0.01吸收值范围。这对应于1.0mg的D-葡萄糖（或0.9mg淀粉）/L在最大样品体积1ml。检测极限：2.0mgD-葡萄糖（或1.8mg淀粉）/L，这对应于0.02吸光度区别在最大体积1ml中。此试剂盒在5-100ugD-葡萄糖范围内呈线性。一个样品溶液的重复测定中，吸收值会有0.005至0.010的波动。当样品体积为1ml时，这相当于0.05-1ml/L浓度的D-葡萄糖。如果样品在准备过程中被稀释，结果需要乘以稀释倍数。例如在样品准备时，样品称重，如10g/L，变异范围将在0.02至0.05g/100g。干扰:如果D-葡萄糖的转化在5分钟内完成，不会产生干扰。可以通过加入D-葡萄糖至反应完成后试管内（例如50ug在0.1ml）以检测干扰。可以看到吸光度显著上升。样品内的干扰物质可以通过加入内标进行分析。可以对这标准进行定量校正。样品操作中的损失可以通过在起始步骤中加入D-葡萄糖进行校正。试剂盒成分Megazyme总淀粉含量测定试剂盒提供有足够运行100次试验的试剂,并提供有全部的试验方法:瓶1:耐热α-淀粉酶(10mL,3,000U/mL在CERALPHA试剂中pH6.5;40°C或1600U/mL在CERALPHA试剂中pH5.0;40°C)。稳定性>4年,4°C保存。瓶2:淀粉葡糖苷酶(10mL,3300U/mL在可溶性淀粉)（或200U/mL在p-nitrophenylβ-maltoside*，pH4.5，40°C）稳定性>4年,4°C保存。完整的分析程序可在www.megazyme.com获得。瓶3:GOPOD试剂缓冲液。磷酸钾缓冲液（0.26M，pH7.4），对羟基苯甲酸（0.22M），叠氮化钠（0.4%W/V）稳定性>4年,4°C保存。注意：1.如果GOPOD缓冲液存储在-20°C，会形成盐结晶，用双蒸水稀释至1L前必须完成溶解。2.此溶液含叠氮化钠（0.4%W/...
